参与者招募与随机化
招募符合条件的行全膝关节置换术的老年人,并随机分配到蛋白质补充组或对照组,以评估蛋白质补充的影响。
在门诊识别受试者,排除标准包括系统炎症性疾病、胰岛素依赖型糖尿病等。随机分配至PRO组(每日40g乳清蛋白)或CON组(维持习惯饮食),共24人完成。
Assessing the responsiveness of musculoskeletal tissues to protein supplementation in vivo in older adults: an exploratory randomized controlled trial
包含随机对照试验设计、2H2O示踪法检测多组织蛋白质合成率、组织分组比较及统计学分析,实现了功能验证与机制验证。
老年人(≥65岁)行全膝关节置换术 骨骼肌(股内侧肌)、滑膜、Hoffa脂肪垫 前/后交叉韧带、髌腱、内外侧半月板、股骨软骨 骨(股骨远端、切迹、滑车、胫骨平台、髌骨)
每日额外补充40g乳清蛋白分离物(Lacprodan SP-9225 Instant)持续14天 2H2O给药方案:第1天8×50mL 70% 2H2O,第2-14天每日50mL 组织FSR基于2H-丙氨酸掺入和身体水2H富集度计算 随机分组(PRO vs CON)及每组12人的样本量 统计显著性阈值P<0.05,未进行多重比较校正
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
招募符合条件的行全膝关节置换术的老年人,并随机分配到蛋白质补充组或对照组,以评估蛋白质补充的影响。
在门诊识别受试者,排除标准包括系统炎症性疾病、胰岛素依赖型糖尿病等。随机分配至PRO组(每日40g乳清蛋白)或CON组(维持习惯饮食),共24人完成。
通过每日补充乳清蛋白分离物,并给予氘水标记,以测量全身组织蛋白质合成率。
PRO组每日睡前摄入40g乳清蛋白,持续14天;所有参与者按既定方案服用2H2O(加载日8×50mL,维持期每日50mL)。
在手术中采集多种肌肉骨骼组织样本,以测量组织蛋白质结合2H-丙氨酸富集度。
手术中收集肌肉、滑膜、脂肪垫、韧带、腱、半月板、软骨和骨样本,立即冷冻保存。
通过质谱法测量身体水和组织蛋白中的2H富集度,用于计算FSR。
使用同位素比质谱仪测量身体水2H富集度,GC-MS测量血清游离2H-丙氨酸富集度,GC-IRMS测量组织蛋白结合2H-丙氨酸富集度。
使用前体-产物法计算各组织FSR,并比较组间差异。
计算每日FSR,使用线性混合模型分析处理效应,并进行组织分组比较。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 蛋白质补充 | Lacprodan SP-9225 Instant(乳清蛋白分离物) | Arla Foods Ingredients Group P/S | -- |
| 氘水给药 | 氘水(70% 2H2O) | Cambridge Isotopes Laboratories | -- |
| 身体活动监测 | Actigraph GT3X加速度计 | Actigraph LLC | -- |
| 唾液样品采集 | Celluron牙科棉签 | -- | -- |
| 身体水2H富集度分析 | DELTA V Advantage同位素比质谱仪 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 血清氨基酸分析 | Agilent 5975C MSD和7890A GC | Agilent | -- |
| 组织蛋白质分析 | MAT 253气相色谱-同位素比质谱仪 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| Dowex交换树脂(AG 50W-X8,100-200目氢型) | Bio-Rad | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 参与者纳入与排除 | 年龄、BMI、手术类型、排除标准(如全身炎症疾病、胰岛素依赖糖尿病、使用影响蛋白质代谢的药物、继发性骨关节炎、术前3个月内关节内皮质类固醇注射) 阅读提示:Methods中的Participants部分 |
| 随机分组 | 随机化方法(block size 6),每组样本量12 阅读提示:Methods中的Study design部分 |
| 蛋白质补充干预 | 乳清蛋白分离物剂量(40g/日)、摄入时间(睡前)、补充天数(14天)、产品批次 阅读提示:Methods中的Study design部分 |
| 氘水给药方案 | 2H2O浓度(70%)、加载剂量(8×50mL)、维持剂量(每日50mL)、给药天数(14天) 阅读提示:Methods中的Deuterated water dosing protocol部分 |
| 样本采集与处理 | 组织类型(14种)、样本处理(液氮冷冻、-80°C储存)、水解条件(6M HCl,110°C,15-18h) 阅读提示:Methods中的Tissue analyses部分 |
| FSR计算 | 前体富集度(身体水2H富集度校正因子3.7)、蛋白结合2H-丙氨酸富集度、时间(14天) 阅读提示:Methods中的Calculations部分 |
| 统计分析 | 主要结局指标(FSR)、线性混合模型固定因子(处理、组织类型)、随机因子(受试者)、协变量(BMI、步数、蛋白质摄入)、显著性水平(P<0.05) 阅读提示:Methods中的Statistical analysis部分 |