参与者招募与样本收集
获取健康男性的血液和精液样本，用于分析B族维生素状态、遗传多态性和精子质量参数。
通过社交网络和公告板招募健康男性志愿者，收集空腹血液样本（EDTA-K2抗凝）和精液样本。血液样本用于检测血浆叶酸、红细胞叶酸、血浆钴胺素、总同型半胱氨酸和提取DNA进行SNP分型；精液样本用于精液质量参数分析。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
健康男性叶酸水平偏低及多态性与精子质量较差的相关性：生活方式和环境对精液及其他男性生育相关参数的影响（Led-Fertyl）横断面研究
Low folate status and related polymorphisms are associated with lower sperm quality in healthy males: The Lifestyle and Environmental Determinants of Seminogram and Other Male Fertility-Related Parameters (Led-Fertyl) cross-sectional study
实验完整度
中横断面研究，包含血液生化检测、SNP基因分型、精液分析及多变量回归，但未进行功能实验或机制验证，证据层级单一。
主要模型
健康成年男性（18-40岁） 外周血样本 精液样本
重点核对
研究人群：197名健康男性，年龄18-40岁，无严重慢性疾病、生殖问题、传染病、近期体重下降（≥5kg）、非法药物滥用等 样本采集：空腹血液和精液样本，精液在禁欲至少3天后采集，并在60分钟内处理 叶酸和维生素B12缺乏的判定标准（血浆叶酸<7 nmol/L，RBCF<340 nmol/L，维生素B12<148 pmol/L） 统计模型：多变量线性回归和逻辑回归，调整年龄、BMI、教育程度、吸烟状况、体力活动、禁欲天数、血浆肌酐等混杂因素 WHO 2010标准定义的精液质量参数参考下限
摘要
背景：叶酸介导的一碳代谢对精子生成过程中的DNA合成、甲基化和基因组完整性至关重要。目标：研究叶酸、钴胺素、同型半胱氨酸状态、影响叶酸介导的一碳代谢的单核苷酸多态性（SNPs）与精子质量之间的关联。方法：在这项横断面研究中，2021年至2023年间招募了197名健康男性（18-40岁），测定了血浆叶酸、红细胞叶酸（RBCF）、血浆钴胺素、总同型半胱氨酸以及影响叶酸和钴胺素状态的SNPs。根据世界卫生组织2010年标准评估精子质量参数。使用多变量线性回归和逻辑回归分析评估B族维生素状态、遗传多态性与精子质量参数之间的关联。结果：血浆叶酸中位数（25、75百分位数）为14.2（11.0，17.8）nmol/L，RBCF为678.2（582.3，785.0）nmol/L。缺乏率，即血浆叶酸<7 nmol/L和RBCF（<340 nmol/L），分别发生在4.6% [95%置信区间（CI）：2.4%，8.5%]和2.6%（95% CI：1.1%，5.8%）的参与者中。与最高三分位数的血浆叶酸（<11.9 nmol/L对比≥17.0 nmol/L）和RBCF（<625.0 nmol/L对比≥742.1 nmol/L）相比，最低三分位数与较低的精子计数[B = ‒0.428，标准误（SE）：0.196和B = ‒0.459，SE：0.183]和较高的精液异常几率[优势比：（OR）：3.4；95% CI：1.4，8.2和OR：2.3；95% CI：1.0，5.3]相关。血浆钴胺素中位数（25、75百分位数）为239.1（203.0，282.3）pmol/L，血浆总同型半胱氨酸为9.6（7.8，11.5）μmol/L。钴胺素缺乏（<148 pmol/L）和血浆总同型半胱氨酸>15 μmol/L分别出现在1.5%（95% CI：0.5%，4.4%）和5.6%（95% CI：3.1%，9.7%）的参与者中。两者均与精子质量参数无关。MTHFD1 1958AA与GG基因型相比，与进行性运动能力降低（B = ‒7.7%，SE：3.8）和精液异常几率较高（OR：4.4；95% CI：1.4，13.7）相关。结论：低叶酸状态与精子质量呈负相关。MTHFD1 1958AA基因型可能与精子质量负相关。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 在未接受叶酸强制补充的健康男性中，叶酸、钴胺素、同型半胱氨酸状态及影响一碳代谢的SNPs与精子质量参数之间是否存在关联？
- 核心机制
- 低叶酸状态可能通过影响一碳代谢，进而影响DNA合成、修复和表观遗传调控，导致精子质量下降。MTHFD1 1958AA基因型可能通过降低从头嘌呤合成，影响生精细胞增殖和DNA合成，从而对精子质量产生负面影响。
- 主要证据
- 多变量线性回归分析显示，血浆叶酸和RBCF最低三分位数与精子总数较低相关；逻辑回归分析显示，血浆叶酸和RBCF最低三分位数与精液异常几率增加相关。MTHFD1 1958AA基因型与进行性运动能力降低和精液异常几率增加相关。
- 研究意义
- 本研究提示父亲叶酸状态可能与精子质量相关，但需进一步研究确定因果关联。未来研究可探讨补充叶酸对男性生育力的潜在益处。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
生化指标和SNP分型检测
测定叶酸、钴胺素、同型半胱氨酸状态及六个相关SNPs的基因型。
使用微生物法检测血浆和红细胞叶酸及血浆钴胺素，使用LC-MS/MS检测血浆总同型半胱氨酸，使用MassARRAY-CPM系统和iPLEX Gold化学进行SNP分型。
精液质量分析
评估精子数量、浓度、活力、存活率和形态等精液质量参数。
按照WHO 2010标准，使用相差显微镜和计算机辅助精液分析系统（SCA）分析精子参数。
统计分析
评估B族维生素状态、SNPs与精子质量参数之间的关联。
使用多变量线性回归和逻辑回归模型分析关联，调整混杂因素。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 血液样本采集 | EDTA-K2真空采血管 | -- | -- |
| DNA提取 | QIAGEN DNeasy血液和组织试剂盒 | QIAGEN | -- |
| 基因分型 | MassARRAY-CPM系统和iPLEX Gold化学 | Agena Bioscience | -- |
| 精液分析 | 相差显微镜（CX43 Olympus） | Olympus | -- |
| 精子分级分析仪（SCA） | Microptic | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 参与者招募 | 纳入标准：健康男性，18-40岁，无严重慢性疾病、生殖问题、传染病、近期体重下降（≥5kg）、非法药物滥用；排除标准：严重慢性疾病、生殖问题等；样本量：197名参与者 阅读提示：Methods: Participants |
| 血液样本采集与处理 | 空腹血液样本，EDTA-K2抗凝，采集后<2小时处理，血浆和全血（稀释1/10于1%抗坏血酸溶液）储存于-80°C；DNA提取使用QIAGEN DNeasy Blood and Tissue Kit 阅读提示：Methods: Blood samples |
| 生化指标测定 | 血浆叶酸和红细胞叶酸：微生物法；血浆钴胺素：微生物法；血浆总同型半胱氨酸：LC-MS/MS；缺乏定义：血浆叶酸<7 nmol/L，RBCF<340 nmol/L，维生素B12<148 pmol/L，tHcy>15 μmol/L 阅读提示：Methods: Blood samples |
| SNP分型 | 检测MTHFR 677C>T, SLC19A1 80G>A, MTHFD1 1958G>A, MTRR 66A>G, MTRR 524C>T, TCII 776C>G；方法：MassARRAY-CPM系统和iPLEX Gold化学 阅读提示：Methods: Blood samples |
| 精液分析 | 禁欲至少3天；精液在60分钟内处理；液化后30分钟处理；分析参数包括精子总数、浓度、活力、存活率、形态；使用WHO 2010标准参考下限 阅读提示：Methods: Semen quality parameters |
| 统计模型 | 多变量线性回归和逻辑回归；调整变量包括年龄、BMI、教育程度、吸烟状态、体力活动、禁欲天数、血浆肌酐等；针对血浆叶酸、RBCF、维生素B12、tHcy分别调整相应的SNPs；基因-营养素和营养素-营养素交互作用通过交互项检验 阅读提示：Methods: Statistical analysis |