孕鼠给药与安全性评估
评估孕鼠对母胎给予RG7916的耐受性和安全性，并记录生殖指标。
孕鼠从E9.5至E19.5每日口服RG7916（10 mg/kg）或HPMC车辆。监测孕鼠体重、妊娠时长、流产率、死胎率、产仔数、未发育胚胎。产后2周评估肝脏组织学、肝酶和血浆细胞因子。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
母胎给予Risdiplam部分挽救脊髓性肌萎缩症SMNΔ7小鼠模型
Maternal-Fetal Administration of Risdiplam Partially Rescues the SMNΔ7 Mouse Model of Spinal Muscular Atrophy
实验完整度
高研究包含体外/体内多个层级：孕鼠给药评估安全性及生殖指标，后代进行表型、存活、运动功能检测，并分析SMN蛋白水平、运动神经元、NMJ及肌肉病理，且包含机制验证和组织学分析。
主要模型
SMNΔ7小鼠（Smn−/−；SMN+/+；SMNΔ7+/+） 孕鼠（Smn+/−杂合交配） 健康对照小鼠（Smn+/−）
重点核对
治疗组：孕鼠E9.5-E19.5每日口服RG7916（10 mg/kg/day），对照组为HPMC车辆 后代于P13取材：体重、右翻正反射、生存曲线 SMN蛋白检测：P13脑、脊髓、骨骼肌Western blot 运动神经元计数：腰椎脊髓ChAT和SMI-32染色 NMJ分析：横腹肌NfL、SV2和α-毒蕈碱受体染色 血浆NfL：P13小鼠血浆检测（Roche Elecsys NfL）
摘要
摘要
目的
脊髓性肌萎缩症（SMA）由存活运动神经元1（SMN1）基因的缺失或突变以及随后存活运动神经元（SMN）蛋白表达减少引起。该疾病的特征为α运动神经元变性以及随后的肌肉萎缩。出生后疾病修饰疗法可改善结局，但仍无法治愈。我们使用SMA的SMNΔ7小鼠模型研究了产前治疗策略。
方法
通过口服灌胃给予孕鼠一种risdiplam样化合物，治疗于妊娠中期开始，并在出生当天停止。评估了妊娠期及出生后孕鼠的生殖指标、肝脏毒性和免疫功能。对后代进行表型监测，并研究SMA的病理标志，包括但不限于运动神经元、神经肌肉接头和肌肉健康。
结果
母胎药物转移对孕鼠是安全的，并显著增加了严重SMA小鼠的体重、运动功能和生存期。它还挽救并维持了肌纤维面积。神经肌肉接头的突触前成分在SMNΔ7仔鼠中仅略有改善，而产前risdiplam治疗后突触后终板大小增加。运动神经元病理未能通过产前暴露于SMN蛋白而完全挽救，可能是因为缺乏持续的出生后干预。通过将risdiplam治疗限制在产前期，我们分离并评估了仅由胚胎暴露于治疗所产生的治疗效果。
解读
我们的努力表明，必须联合产前和产后治疗才能在SMA患者的治疗中获得最佳治疗结果。ANN NEUROL 2026;100:584–599
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 在SMNΔ7小鼠模型中，母胎给予risdiplam样化合物RG7916是否安全并能改善SMA的症状和病理？
- 核心机制
- 产前暴露于SMN蛋白通过增加SMN蛋白水平，在脊髓和骨骼肌中发挥保护作用，改善肌肉健康和突触后终板大小，但未能完全保护运动神经元，表明产前和产后治疗需联合应用。
- 主要证据
- SMNΔ7小鼠模型：孕鼠E9.5-E19.5口服RG7916，P13时检测到脊髓和肌肉SMN水平升高，小鼠体重、右翻正反射和生存率显著改善，肌纤维面积增加，突触后终板大小恢复，但运动神经元计数未完全维持，且血浆NfL水平仍升高。
- 研究意义
- 研究结果表明，产前治疗可部分改善SMA表型，但需要结合出生后治疗以获得最佳疗效，为SMA的产前治疗策略提供了临床前依据。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
后代表型与生存分析
评估产前RG7916暴露对SMA小鼠体重、运动功能和生存期的影响。
后代小鼠从P1开始监测体重，每两天记录右翻正反射时间，并记录生存直至人道终点。与车辆组和健康对照比较。
SMN蛋白表达检测
确定产前RG7916暴露后，P13时脑、脊髓和骨骼肌中的SMN蛋白水平是否维持升高。
P13时收集脑、脊髓和胫骨前肌，进行免疫印迹分析SMN蛋白水平，以α-tubulin为内参。
运动神经元病理分析
评估产前RG7916治疗是否足以保护运动神经元，并检查神经元大小和血浆NfL水平。
收集腰椎脊髓，进行ChAT和SMI-32染色，计数每个前角的运动神经元数量，并测量细胞体面积。收集血浆检测NfL浓度。
神经肌肉接头（NMJ）分析
评估产前RG7916对NMJ突触前和突触后病理的影响。
在P13时解剖横腹肌，进行NfL、SV2和α-银环蛇毒素染色，分析突触前NfL积累、突触后终板面积和终板占据率。
骨骼肌病理分析
评估产前RG7916对骨骼肌肌纤维面积、成熟度和结缔组织比例的影响。
P13时收集胫骨前肌，进行H&E染色，分析肌纤维面积、中心核数量和结缔组织面积。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | RG7916 | -- | -- |
| 药物处理车辆 | 羟丙甲纤维素 | -- | -- |
| 吐温-80 | -- | -- | |
| 基因分型 | Phire组织直接PCR预混液 | Thermo Scientific | F170L |
| 免疫印迹 | RIPA裂解缓冲液 | -- | -- |
| PowerGen 125匀浆器 | Fisher Scientific | -- | |
| Bradford蛋白定量试剂盒 | Thermo-Fisher | -- | |
| Odyssey封闭缓冲液 | LI-Cor | -- | |
| Odyssey成像系统 | LI-Cor | -- | |
| 组织学 | LOGOS微波混合组织处理器 | Milestone Medical | -- |
| XL CV5030自动染色机 | Leica | -- | |
| MIRAX MIDI数字切片扫描仪 | Zeiss | -- | |
| 运动神经元染色 | 胆碱乙酰转移酶抗体 | -- | -- |
| SMI-32抗体 | -- | -- | |
| NMJ染色 | 神经丝蛋白抗体 | -- | -- |
| 突触囊泡蛋白2抗体 | -- | -- | |
| α-银环蛇毒素 | -- | -- | |
| NMJ成像 | Axio imager M2显微镜 | Zeiss | -- |
| 血液采集 | Microcuvette CB 300 K2E采血管 | Sarstedt | -- |
| 血液处理 | 离心机 5242R | Eppendorf | -- |
| 血浆检测 | Roche Elecsys NfL试剂盒 | Roche | -- |
| Roche Cobas Pro e801仪器 | Roche | -- | |
| 细胞因子分析 | Luminex 200平台 | -- | -- |
| 小鼠细胞因子/趋化因子14重检测阵列 | Eve Technologies Corp | -- | |
| 统计分析 | GraphPad Prism 11 | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | SMNΔ7小鼠（Smn−/−；SMN+/+；SMNΔ7+/+），由Smn+/−杂合小鼠交配产生；遗传背景为friend leukemia virus B congenic 阅读提示：Methods中的Animals部分 |
| 孕期给药 | 孕鼠从E9.5至E19.5每日口服灌胃，剂量为RG7916 10 mg/kg/day，车辆为0.5% HPMC和0.1% Tween-80；给药期间监测孕鼠体重以调整剂量 阅读提示：Methods中的Drug Administration部分 |
| 后代表型监测 | 体重从P1起每2天记录；右翻正反射于P5-P20检测；人道终点为连续4天体重下降、总体重下降20%或严重尾部坏死 阅读提示：Methods中的Phenotypic Analysis和Motor Function部分 |
| 样本采集与检测时间点 | P13时取材进行组织分析：脑、脊髓、骨骼肌用于免疫印迹；腰椎脊髓用于运动神经元计数；横腹肌用于NMJ分析；胫骨前肌用于肌肉病理；血浆用于NfL和细胞因子检测 阅读提示：Methods中的Immunoblot, Immunohistochemistry, Blood Collection and Plasma Analysis部分 |
| 统计设计 | 样本量通过资源方程确定（E=11-14），治疗组与车辆组非配对t检验、单因素方差分析（Tukey）、双因素方差分析（Bonferroni）、Kaplan-Meier生存分析（log-rank检验）；α=0.05；异常值用Grubbs检验 阅读提示：Methods中的Statistical Analyses部分 |