羊膜基质细胞通过促进角膜缘上皮干细胞扩增助力角膜上皮组织工程

目的：探讨羊膜基质细胞（AMSCs）是否能在角膜上皮组织工程中促进角膜缘干细胞（LSCs）的扩增。方法：将兔角膜缘上皮培养在含有活基质细胞（L-dAM）或死基质细胞（D-dAM）的羊膜上。使用光学显微镜和扫描电子显微镜评估体外扩增的兔角膜缘上皮片的形态和微结构特征。通过集落形成效率（CFE）实验和ΔNp63α、PAX6、Ki67和K14的免疫荧光染色评估干性特性和分化状态。通过定量实时聚合酶链反应和蛋白质印迹分析角膜缘上皮片中的基因表达。通过RNA测序解码LSCs和AMSCs的转录组变化。通过液相色谱-串联质谱/代谢组学和酶学NAD+/NADH比值实验定量细胞内NAD+动态。结果：与D-dAM相比，在L-dAM上培养的LSCs表现出更优的紧密连接完整性和集落形成能力，ΔNp63α、PAX6、Ki67和K14表达上调，而K12表达下调。在D-dAM培养物中补充烟酰胺恢复了NAD+依赖性干细胞稳态，通过完全恢复CFE和协调的干/祖细胞标记物分子修复以及持续的K12抑制，达到与L-dAM的功能等效。机制上，共培养的AMSCs通过外泌体转移NAD+以维持LSC稳态，囊泡抑制导致NAD+耗竭、干性衰竭和加速分化。结论：AMSCs可促进角膜缘上皮干细胞扩增，为角膜上皮组织工程提供临床意义。