美洲大蠊提取物Ento-B对二硝基氯苯联合乙酸诱导的大鼠溃疡性结肠炎治疗作用的研究

Study on the effect of the treatment of Periplaneta americana L. extract Ento-B by Dinitrochlorobenzene combined with acetic acid induced UC in rats.

作者信息Sheng-Shuai Liu, Yu-Sheng Xu, Ahunova Hilola, Nong Zhou, Miao He, Cheng-Gui Zhang, Heng Liu
PMID33605307
发布时间2021-02-15
DOI10.1590/ACB360102

实验完整度

包含动物模型建立、药物分组干预、多项指标检测(DAI、CMDI、HS、血清因子、MPO)及病理学评估,但缺乏体外实验或机制层面的深入验证。

主要模型

SD大鼠慢性溃疡性结肠炎模型

重点核对

模型建立:2.0% DNCB丙酮溶液背部涂抹0.3 mL/次,每日1次,连续14天;第15天0.1% DNCB乙醇(50%浓度)灌胃0.25 mL/只;第16天6%乙酸溶液0.7 mL灌胃,10秒后用3 mL生理盐水冲洗 分组与给药:模型建立后第7天,按DAI评分分层随机分为模型组、柳氮磺吡啶组(400 mg/kg)和高、中、低剂量Ento-B组(200、100、50 mg/kg),每组10只,连续灌胃14天 检测指标:DAI评分、CMDI评分、HS评分、血清IL-4、IL-10、TNF-α、MDA、SOD、iNOS水平,结肠组织MPO表达 统计方法:数据以x±s表示,正态分布数据用方差检验,非正态分布用秩和检验,p<0.05或p<0.01为差异有统计学意义

摘要

目的:研究美洲大蠊提取物Ento-B对2,4-二硝基氯苯和乙酸诱导的慢性溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用,并探讨其初步作用机制。方法:采用2,4-二硝基氯苯联合乙酸诱导大鼠慢性溃疡性结肠炎。给予柳氮磺吡啶(400 mg/kg)和Ento-B(200 mg/kg、100 mg/kg、50 mg/kg)灌胃,根据疾病活动指数(DAI)评分、结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分、组织病理学评分(HS)以及血清中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的水平评价效果。结果:与模型组相比,各剂量Ento-B均可降低CMDI评分(p < 0.05)、HS评分(p < 0.05或p < 0.01),显著增加UC大鼠血清中IL-4、IL-10、SOD的表达(p < 0.01),降低TNF-α、MDA、iNOS的水平,显著改善UC大鼠结肠病变程度。结论:Ento-B可能对UC大鼠溃疡性结肠炎的治疗发挥重要作用,其机制可能与增加IL-4、IL-10、SOD表达,降低TNF-α、MDA、iNOS表达有关。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
美洲大蠊提取物Ento-B对DNCB联合乙酸诱导的慢性溃疡性结肠炎大鼠是否具有治疗作用,其初步机制是什么?
核心机制
Ento-B可能通过增加IL-4、IL-10、SOD表达,降低TNF-α、MDA、iNOS表达,从而调节免疫、抑制炎症、减轻氧化损伤,改善结肠病变。
主要证据
在DNCB联合乙酸诱导的UC大鼠模型中,Ento-B各剂量可显著降低CMDI和HS评分,调节血清细胞因子和氧化应激指标,高剂量组效果与柳氮磺吡啶组相当。
研究意义
为美洲大蠊提取物Ento-B作为防治溃疡性结肠炎的药物开发提供数据支持。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

建立慢性溃疡性结肠炎大鼠模型

模拟人类溃疡性结肠炎的慢性病理过程

SD大鼠背部剃毛后涂抹2.0% DNCB丙酮溶液致敏,第15天灌胃0.1% DNCB乙醇,第16天灌胃6%乙酸溶液,建立慢性UC模型。

2

分组与药物干预

比较不同剂量Ento-B与阳性药物柳氮磺吡啶的治疗效果

模型建立后第7天,按DAI评分分组,模型组和正常组给予生理盐水,其他组分别灌胃柳氮磺吡啶或不同剂量Ento-B,连续给药14天。

3

评估疾病活动指数与器官指数

评价药物对UC大鼠整体疾病严重程度和免疫功能的影响

记录DAI评分,称量肝脏、脾脏、胸腺重量并计算器官指数。

4

评估结肠损伤与病理变化

评价药物对结肠黏膜损伤和组织病理学的影响

测量结肠长度和重量,计算结肠指数,按标准进行CMDI和HS评分,制作病理切片进行HE染色观察。

5

检测血清炎症因子与氧化应激指标

探究药物对免疫和氧化应激相关分子表达的影响

采用ELISA和生化试剂盒检测血清中IL-4、IL-10、TNF-α、MDA、SOD和iNOS的水平。

6

检测结肠组织MPO表达

评估结肠组织中中性粒细胞浸润程度

检测结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的表达。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
乙酸Ruijin Ruijinte Chemical Co., Ltd.20130604
柳氮磺吡啶Shenzhen Regent Biochemical Technology Co., Ltd.20140925
Ento-B(美洲大蠊提取物)--20140438
大鼠白细胞介素-4 ELISA试剂盒Neobioscience Co., Ltd.R150929-002a
大鼠白细胞介素-10 ELISA试剂盒Neobioscience Co., Ltd.R150929-002a
肿瘤坏死因子-α ELISA试剂盒Neobioscience Co., Ltd.20151125
隐血试剂盒Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute20150424
丙二醛试剂盒Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute20151125
超氧化物歧化酶试剂盒Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute20151226
诱导型一氧化氮合酶试剂盒Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute20151221
电子天平METTLER TOLEDOML204/02
紫外可见分光光度计PERSEE ANALYTICST6 New Century
酶标仪Austria Anthos Company201
电热鼓风干燥箱Beijing ever bright medical treatment instrument Co., Ltd.101E

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
动物饲养
动物品系、性别、体重、数量、饲养环境(IVC系统,18°C,50% RH)
阅读提示:Methods部分
模型建立
DNCB浓度、涂抹剂量、次数、天数;乙酸浓度、剂量、灌胃时间;正常组处理
阅读提示:Methods-Experimental methods- Establishment of the model
分组与给药
分组方法、各组剂量、给药方式(灌胃)、给药体积、持续时间
阅读提示:Methods-Experimental methods- Grouping and mode of administration
样本采集与处理
麻醉方式、取血方式、血清制备条件、器官称重、结肠处理
阅读提示:Methods-Experimental methods- Grouping and mode of administration
指标检测
DAI评分标准、CMDI评分标准、HS评分标准、ELISA和生化检测步骤
阅读提示:Methods-Experimental methods- Table 1, 以及各检测试剂盒说明书