TNBS剂量筛选
确定诱导中度回肠炎所需的TNBS剂量。
将18只雄性山羊随机分为6组，分别注射生理盐水、40%乙醇、30 mg TNBS或20、30、40 mg TNBS溶于40%乙醇的溶液，第7天通过剖腹手术取回肠段进行病理评分，选择30 mg TNBS作为模型剂量。
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一种研究山羊回肠炎诱导的内脏超敏反应的新型模型
A novel model for studying ileitis-induced visceral hypersensitivity in goats.
实验完整度
高包含TNBS剂量筛选实验、正式模型实验、宏观与微观病理评分、MPO和细胞因子ELISA检测、VMR记录，以及多时间点动态观察。
主要模型
山羊TNBS-乙醇诱导回肠炎模型 山羊（约1岁，雌雄各半）
重点核对
TNBS剂量：30 mg TNBS溶于40%乙醇，共1.2 ml，注入回肠壁 观察时间点：第3、7、14、21、28天 VMR检测压力：20、40、60、80、100 mmHg，连续斜坡扩张，每压力持续6秒 对照组：生理盐水注射
摘要
背景：内脏超敏反应（VH）是人类和动物许多胃肠道疾病（如炎症性肠病（IBD））中的常见病症。大多数研究通常诱导克罗恩病/结肠炎来研究小实验动物的VH。虽然农场动物常患IBD，但其VH迄今尚未被研究。由于山羊可能患有约翰氏病（一种自然发生的类似克罗恩病的疾病），它们可能适合用于研究大型动物常见肠道疾病中VH的机制。在本研究中，60只健康山羊（雌雄各半）被平均分为2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）组和生理盐水组。通过剖腹手术将1.2毫升TNBS-乙醇溶液（40%乙醇中含30毫克TNBS）或等体积的等渗盐水注入末端回肠壁。根据宏观和微观病理评分以及髓过氧化物酶、白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的水平确定回肠炎的严重程度，并在第3、7、14、21和28天通过结直肠扩张的躯体内脏运动反应（VMR）评估VH。VMR采用连续斜坡扩张模式，每个压力（20、40、60、80和100 mmHg）持续6秒。结果：与生理盐水组相比，TNBS处理的山羊表现出明显的透壁病理变化，宏观和微观变化评分以及回肠中髓过氧化物酶、白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的水平显著升高（P < 0.05），并且对结直肠扩张的VMR显著增强。山羊在TNBS处理后第3至21天表现出明显的回肠炎，在第7至28天表现出VH。结论：本实验成功建立了一种可重复的回肠炎和VH模型，通过在山羊回肠壁注射TNBS-乙醇溶液实现。该模型可用于研究IBD的发病机制和VH的机制，以及评估新治疗方案的疗效。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 山羊是否可以通过回肠壁注射TNBS-乙醇溶液建立回肠炎和内脏超敏反应模型，以用于研究大型动物IBD和VH的机制？
- 核心机制
- 文中未明确说明VH的具体分子机制，但讨论了肥大细胞可能通过释放炎症介质激活PAR-2，进而敏化TRPV1和释放SP/CGRP导致神经源性炎症和超敏反应。
- 主要证据
- 主要证据包括山羊回肠壁注射TNBS后出现明显的宏观和微观病理变化，MPO、TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高，以及VMR对结直肠扩张反应增强。
- 研究意义
- 该模型可用于研究反刍动物和人类IBD的发病机制及VH的机制，并评估新治疗方案的疗效。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
回肠炎与VH模型建立
在60只山羊中建立回肠炎和内脏超敏反应模型，并动态评估。
60只山羊随机分为TNBS组和生理盐水组，分别注射TNBS-乙醇溶液或等量生理盐水，于术后第3、7、14、21、28天测量体重、进行EMG记录VMR、取样进行组织学和ELISA检测。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 麻醉 | 酚磺乙胺 | -- | -- |
| 赛拉唑 | North China Pharmaceutical Co., Ltd | -- | |
| 术后伤口处理 | 聚维酮碘溶液 | -- | -- |
| 组织固定 | 福尔马林 | -- | -- |
| ELISA | ELISA试剂盒 | Neo Bioscience Inc. (for cytokines); eBioscience, Inc. (for MPO) | -- |
| 蛋白浓度测定 | Nano Drop分光光度计 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | -- |
| EMG记录 | 肌电图记录仪 | Nanjing Medease Science and Technology Co., Ltd | -- |
| MedLab-U/4C501H处理系统 | Nanjing Medease Science and Technology Co., Ltd | -- | |
| 数据分析 | MedLabV6.3软件 | Nanjing Medease Science and Technology Co., Ltd | -- |
| 统计软件 | SPSS 18.0版本 | SPSS Inc. | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物准备 | 健康山羊（约1岁）雌雄各半，共60只；术前禁食12小时 阅读提示：Methods - Experimental animals |
| 麻醉与手术 | 麻醉方案：阿托品、酚磺乙胺、赛拉唑、氯胺酮；手术：腹腔切开，暴露回肠末端 阅读提示：Methods - Determination of TNBS dosage for model experiment |
| TNBS给药 | TNBS剂量：30 mg溶于40%乙醇，1.2 ml，分五点注入回肠壁，距回盲连接约15 cm 阅读提示：Methods - Experimental setup |
| VMR记录 | EMG电极位置、气球插入位置、扩张压力（20-100 mmHg）及持续时间（6秒） 阅读提示：Methods - Colorectal distension testing |
| 组织学与ELISA | 组织固定、染色（HE和甲苯胺蓝）；ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α和MPO 阅读提示：Methods - Macroscopic and microscopic observations, Measurement of cytokines and MPO |