TRIM7在脓毒症患者外周血单个核细胞中的表达及其早期诊断价值研究

Study on the expression of TRIM7 in peripheral blood mononuclear cells of patients with sepsis and its early diagnostic value.

作者信息Mingfeng Lu, Aiwen Ma, Jianwei Liu, Wenzhen Zhou, Peng Cao, Tao Chu, Lu Fan
PMID36402943
发布时间2022-11-19
DOI10.1186/s12879-022-07874-6

实验完整度

包含横断面临床样本检测(免疫荧光、qPCR)、相关性分析和ROC诊断评估,但缺乏功能验证或机制验证实验。

主要模型

脓毒症患者外周血单个核细胞(PBMCs) 非脓毒症感染患者PBMCs 健康对照PBMCs

重点核对

研究对象分组:脓毒症(34例)、非脓毒症感染(35例)、健康对照(25例) PBMCs分离方法:Ficoll密度梯度离心 TRIM7 mRNA检测方法:RT-qPCR,以GAPDH为内参,2−△△Ct法计算 TRIM7蛋白检测方法:免疫荧光染色,ImageJ定量 诊断评估:ROC曲线,AUC=0.798,敏感性73.5%,特异性77.1%

摘要

背景:脓毒症的早期诊断有利于尽早提出合理的临床治疗方案。本研究旨在探讨TRIM7在脓毒症患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达及其诊断价值。方法:这是一项横断面研究。共纳入急诊室69例感染性疾病患者,分为脓毒症组(34例)和非脓毒症感染组(35例),并选取25名健康者作为对照组。通过免疫荧光染色观察PBMCs中TRIM7的表达。探讨TRIM7 mRNA表达与急性生理与慢性健康评估II(APACHE II)评分、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分、白细胞(WBC)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估TRIM7表达对脓毒症早期诊断的价值。结果:脓毒症组患者PBMCs中代表TRIM7表达水平的荧光强度在三组中最低。脓毒症组PBMCs中TRIM7 mRNA表达较非脓毒症感染组和对照组显著降低(P < 0.05)。Spearman相关分析显示,TRIM7 mRNA表达与APACHE II评分、SOFA评分、WBC、CRP、PCT、TNF-α和IL-6呈负相关。ROC曲线分析显示,PBMCs中TRIM7 mRNA表达诊断脓毒症的曲线下面积(AUC)为0.798,95%置信区间为0.691-0.905,敏感性为73.5%,特异性为77.1%。结论:脓毒症患者PBMCs中TRIM7表达显著下调,对脓毒症的早期诊断具有一定的临床价值。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
探讨TRIM7在脓毒症患者PBMCs中的表达及其早期诊断价值。
核心机制
文中未明确说明,仅推测TRIM7可能通过TLR4通路调节炎症反应,且脓毒症患者中表达下调可能与宿主自我保护有关。
主要证据
基于横断面研究,免疫荧光显示脓毒症组TRIM7蛋白荧光强度最低;qPCR显示TRIM7 mRNA表达显著下调,且与APACHE II、SOFA评分及炎症指标负相关;ROC曲线显示AUC为0.798。
研究意义
TRIM7在PBMCs中的表达水平可作为脓毒症早期诊断的辅助指标,补充现有感染标志物。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

研究设计与样本收集

纳入脓毒症、非脓毒症感染和健康对照,收集临床数据和外周血样本。

从急诊室纳入69例感染性疾病患者和25例健康对照,其中脓毒症34例,非脓毒症感染35例。收集入院时基线临床数据,包括年龄、性别、合并症、感染部位,并进行APACHE II和SOFA评分及炎症指标检测。

2

TRIM7蛋白表达检测

观察TRIM7在PBMCs中的表达水平。

通过Ficoll密度梯度离心分离PBMCs,进行免疫荧光染色,用激光共聚焦显微镜观察和拍照,并用ImageJ软件定量荧光强度。

3

TRIM7 mRNA表达检测

检测TRIM7 mRNA在PBMCs中的表达水平。

从PBMCs中提取RNA,逆转录合成cDNA,用SYBR Green实时PCR检测TRIM7 mRNA表达,以GAPDH为内参,2−△△Ct法计算相对定量。

4

相关性分析

探究TRIM7 mRNA表达与炎症指标和疾病严重程度评分的关系。

采用Spearman相关分析,评估TRIM7 mRNA表达与APACHE II、SOFA评分、WBC、CRP、PCT、TNF-α和IL-6的相关性。

5

诊断价值评估

评估TRIM7 mRNA表达对脓毒症的早期诊断价值。

使用ROC曲线分析TRIM7 mRNA表达诊断脓毒症的敏感性、特异性和AUC,并与其他临床指标比较。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
Ficoll Paque密度梯度分离液GE Healthcare Bio-Sciences71101900-EH
TRIM7兔多克隆抗体LifeSpan BiosciencesLS-C146201
山羊抗兔IgG-FITC抗体Hangzhou HuaAn BiotechnologyHA1004
DAPI染色液BeyotimeC1002
激光共聚焦荧光显微镜ZeissLSM710
RNA提取试剂盒cwbioCW0584S
SYBR Green实时PCR预混液NovoproteinE096-01A
Roche Light Cycler 2.0实时荧光定量PCR仪Roche--
人细胞因子ELISA试剂盒(TNF-α)NeoBioscienceehc103a.96
人细胞因子ELISA试剂盒(IL-6)NeoBioscienceehc007.96
ImageJ软件----
SPSS 26.0统计软件IBM--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
研究设计与样本分组
各组样本量、纳入和排除标准、脓毒症诊断标准(Sepsis 3.0)
阅读提示:Methods部分:'Research design'、'Inclusion and exclusion criteria'
PBMCs分离
Ficoll Paque密度梯度离心方法、抗凝管类型、离心条件(文中未明确说明)
阅读提示:Methods部分:'The separation of PBMCs'
TRIM7蛋白检测(免疫荧光)
细胞浓度、滴加体积、固定和封闭条件、抗体稀释比例、封片剂、图像采集和定量方法
阅读提示:Methods部分:'The expression of TRIM7 protein in PBMCs detected by immunofluorescence'及图1图注
TRIM7 mRNA检测(RT-qPCR)
RNA提取和逆转录步骤、引物序列、PCR反应条件、内参基因、定量方法
阅读提示:Methods部分:'Detection of the expression level of TRIM7 mRNA'
相关性分析
相关分析指标(APACHE II、SOFA、WBC、CRP、PCT、TNF-α、IL-6)及数据分布类型
阅读提示:Methods部分:'Statistical methods'及表2
诊断价值评估
ROC曲线分析方法、cut-off值、AUC、敏感性、特异性
阅读提示:Results部分:'Diagnostic value of the expression level of TRIM7 in PBMCs for sepsis'及表3和图2