病毒构建与增殖
构建并增殖PRV XJ del gI/gE/TK和PRV XJ株，用于后续动物实验。
采用实验室先前构建的PRV XJ del gI/gE/TK和PRV XJ株，在PK-15细胞中培养增殖。
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伪狂犬病毒gI/gE/TK缺失株对仔猪肠道免疫保护作用
The immunity protection of intestine induced by pseudorabies virus del gI/gE/TK in piglets.
实验完整度
中包含动物实验（猪）和多种组织学、免疫学检测，但未包括体外细胞实验或多种模型（如小鼠）的独立验证。
主要模型
仔猪模型（Landrace） PK-15细胞
重点核对
仔猪日龄（约5日龄） 免疫剂量为107 TCID50的PRV XJ del gI/gE/TK，加强免疫在2周后 攻毒剂量为106 TCID50的PRV XJ株，攻毒途径为滴鼻 攻毒后第5天安乐死，组织取样及检测 每组样本量n=3
摘要
与伪狂犬病毒（PRV）经典株相比，PRV变异株具有更强的传播性和致病性，给全球养猪业造成了巨大灾难。基于该变异株，本实验室初步构建了缺失gE/gI/TK基因的改良伪狂犬病毒。本研究评估了PRV XJ del gI/gE/TK对仔猪肠道损伤的保护效力。结果表明，免疫PRV XJ del gI/gE/TK的仔猪可减轻由PRV XJ变异株引起的肠道损伤，包括降低病毒载量、抑制炎症以及维持肠道结构和功能。此外，PRV XJ del gI/gE/TK还强烈激活肠道固有免疫应答，增加抗病毒因子mRNA的表达和SIgA的分泌，以对抗PRV XJ变异株的攻击。我们的研究表明，PRV XJ del gI/gE/TK能够抑制PRV XJ变异株引起的肠道损伤，并激活肠道的固有免疫应答。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- PRV XJ del gI/gE/TK疫苗能否保护仔猪免受PRV XJ变异株引起的肠道损伤？
- 核心机制
- PRV XJ del gI/gE/TK通过激活肠道的固有免疫应答，包括上调IFN-β、IFN-γ、ISG15和OAS1等抗病毒因子的mRNA表达，以及增加SIgA的分泌，同时抑制炎症反应，从而保护肠道屏障功能。
- 主要证据
- 在仔猪模型上，免疫组相比感染组病毒载量降低、炎症细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α）水平显著降低，肠道绒毛高度/隐窝深度比维持，肠上皮紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin）表达不变，血浆DAO水平正常，抗病毒因子及SIgA表达增加。
- 研究意义
- 该疫苗可有效保护仔猪免受PRV XJ变异株引起的肠道损伤，为PRV特别是肠道部位的防控提供了候选疫苗。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
动物分组与免疫
评估PRV XJ del gI/gE/TK的免疫原性及其对攻毒的保护效果。
将9头仔猪随机分为3组（Vehicle组、Vaccination组、Mock组），每组3头。Vaccination组滴鼻接种107 TCID50的PRV XJ del gI/gE/TK，并在2周后加强免疫；Vehicle组和Mock组滴鼻接种DMEM。
攻毒与临床观察
评估免疫后对PRV XJ变异株攻击的临床保护效果。
在免疫后3周，Vaccination组和Vehicle组滴鼻攻毒106 TCID50的PRV XJ株，Mock组滴鼻DMEM。每日监测直肠温度、临床症状和病毒排毒。
样本采集与检测
评估免疫后对PRV XJ攻毒的组织病理、病毒载量、炎症因子、肠道屏障和免疫应答的影响。
攻毒后第5天安乐死所有仔猪，采集血液、肠道组织（十二指肠、空肠、回肠、结肠）进行ELISA、qPCR、组织病理学（H&E、AB-PAS、IHC）及Western blot检测。
统计分析
分析不同组间差异的统计学意义。
使用One-way ANOVA进行统计分析，结果以平均值±标准差表示，重复至少三次，p<0.05为差异显著。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
验证样本或模型特征
验证细胞功能变化
评估体内效果
数据分析与统计
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 病毒培养 | 杜尔贝科改良伊格尔培养基 | -- | -- |
| 血清学检测 | PRV gB抗体ELISA试剂盒 | ID-VET | -- |
| PRV gI抗体ELISA试剂盒 | IDEXX | -- | |
| 免疫组织化学 | SIgA抗体 | Abcam | ab112746 |
| qRT-PCR | RNAiso Plus | -- | -- |
| PrimeScript逆转录试剂盒 | -- | -- | |
| TB Green Premix Ex Taq | -- | -- | |
| 罗氏Lightcycler96实时荧光定量PCR仪 | Roche | -- | |
| Western blot | ZO-1抗体 | Proteintech | 21773-1-AP |
| Occludin抗体 | Proteintech | 27260-1-AP | |
| β-actin抗体 | Abclonal | AC026 | |
| HRP标记的山羊抗兔IgG（H+L） | Abclonal | AS014 | |
| SuperSignal™ West Pico Plus化学发光底物 | -- | -- | |
| BCA蛋白定量试剂盒 | -- | -- | |
| ELISA | IL-1β ELISA试剂盒 | IDEXX | -- |
| IL-4 ELISA试剂盒 | IDEXX | -- | |
| IL-6 ELISA试剂盒 | IDEXX | -- | |
| IL-8 ELISA试剂盒 | IDEXX | -- | |
| IL-10 ELISA试剂盒 | IDEXX | -- | |
| TNF-α ELISA试剂盒 | IDEXX | -- | |
| DAO ELISA试剂盒 | Neobioscience | -- | |
| 酶标仪 | Bio-Rad | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 品种、日龄、数量、分组 阅读提示：Materials and methods 2.2 |
| 免疫方案 | 剂量、途径、时间、加强免疫 阅读提示：Materials and methods 2.2 |
| 攻毒方案 | 毒株、剂量、途径、时间 阅读提示：Materials and methods 2.2 |
| 样本采集 | 时间点、组织类型 阅读提示：Materials and methods 2.2 and Results 3.2 |
| 检测指标 | ELISA、qPCR、Western blot等方法的条件 阅读提示：Materials and methods 2.3-2.8 |