建立DNFB诱导的慢性瘙痒模型
建立特应性皮炎相关的慢性瘙痒小鼠模型。
对BALB/c小鼠腹部和背部皮肤脱毛,腹部涂抹0.5% DNFB致敏,第5天后隔日于颈背涂抹0.25% DNFB激发,对照组仅用溶剂。
Gut Microbiota Mitigates Chronic Itch and Cutaneous Inflammation in DNFB-Induced Atopic Dermatitis Mice.
涉及动物模型建立、16S rRNA测序、粪便微生物群移植、行为学评估、组织学分析、免疫组化和代谢组学,包含功能验证和机制初步探索。
DNFB诱导的特应性皮炎慢性瘙痒小鼠模型(BALB/c小鼠) 抗生素混合物处理(ABX)的健康受体小鼠 健康供体小鼠
DNFB诱导剂量与方案:0.5% DNFB 50 μL致敏,0.25% DNFB 30 μL隔日激发(第6, 9, 11, 13天),溶剂为丙酮:橄榄油=4:1 行为评估时间点:第1, 5, 7, 10, 12, 14天,适应30分钟后记录1小时抓挠 抗生素混合物浓度:万古霉素0.5 g/L、氨苄青霉素1 g/L、新霉素1 g/L、甲硝唑1 g/L,饮水给药 FMT方案:新鲜粪便1g溶于10mL无菌PBS,离心后取上清,100 μL/只灌胃7天 样本量:每组6-8只小鼠
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立特应性皮炎相关的慢性瘙痒小鼠模型。
对BALB/c小鼠腹部和背部皮肤脱毛,腹部涂抹0.5% DNFB致敏,第5天后隔日于颈背涂抹0.25% DNFB激发,对照组仅用溶剂。
评估模型小鼠的瘙痒行为。
在指定时间点将小鼠放入透明笼中适应30分钟后,通过视频系统记录1小时的自发抓挠行为,统计分析抓挠次数和持续时间。
比较慢性瘙痒小鼠与健康对照的肠道微生物群组成差异。
收集新鲜粪便,提取DNA,扩增16S rRNA V3-V4区,进行高通量测序,分析α多样性和β多样性。
验证肠道微生物群在慢性瘙痒中的因果作用。
分两部分:1) 将模型小鼠粪便移植到ABX预处理的健康小鼠,观察瘙痒行为;2) 将健康小鼠粪便移植到DNFB模型小鼠,评估抓挠行为和皮肤炎症。
评估皮肤病理变化和炎症细胞浸润。
皮肤和结肠组织固定、包埋、切片,进行H&E染色测量表皮厚度,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞,免疫组化检测IL-4、IL-13、IL-31表达。
评估全身系统性炎症反应。
使用ELISA试剂盒检测血清中LPS、IL-6、IL-1β、TNF-α和IgE水平。
探索FMT处理后慢性瘙痒小鼠的代谢谱变化。
使用Q Exactive HF质谱仪进行LC-MS/MS检测,正负离子模式采集数据,使用Compound Discoverer 3.1处理数据,进行差异代谢物和通路富集分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 菌群清除 | 盐酸万古霉素 | Aladdin | V105495 |
| 硫酸新霉素 | Aladdin | N109017 | |
| 甲硝唑 | Aladdin | M109874 | |
| 模型建立 | 橄榄油 | MCE | -- |
| 免疫组化 | IL-4抗体 | Proteintech | 84758-5-RR |
| IL-13抗体 | Affinity | DF6813 | |
| IL-31抗体 | Omnimabs | OM281946 | |
| ELISA检测 | ELISA试剂盒 | Xinbosheng Biotechnology Co., Ltd. | -- |
| ELISA试剂盒 | Huamei Bioengineering Co., Ltd. | -- | |
| 酶标仪 | Agilent | -- | |
| 代谢组学检测 | Q Exactive HF高分辨质谱仪 | BGI Genomics | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 模型建立 | DNFB浓度、剂量、溶剂比例、给药时间点和部位 阅读提示:Methods - Establishment of the Chronic Itching Model and Evaluation of Scratching Behavior; Figure 1A |
| 行为学评估 | 评估时间点、适应时间、记录时长、抓挠事件定义 阅读提示:Methods - Establishment of the Chronic Itching Model and Evaluation of Scratching Behavior |
| 菌群测序 | 粪便采集、DNA提取、16S rRNA V3-V4区扩增、样本量、测序平台 阅读提示:Methods - Fecal Collection and 16S rRNA Gene Sequencing Analysis |
| FMT | 抗生素混合物组成和浓度、处理时间、粪便上清制备、灌胃剂量和频率 阅读提示:Methods - Antibiotic Cocktail Therapy and Fecal Microbiota Transplantation; Figure 4A和5 |
| 组织学分析 | 固定、包埋、切片、H&E染色、表皮厚度测量方法 阅读提示:Methods - Histological and Immunohistochemical Analyses |
| ELISA和代谢组学 | ELISA试剂盒品牌、代谢组学质谱仪型号、数据处理参数 阅读提示:Methods - Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Analysis和Non-Targeted Metabolomics Detection Method |