人群干预与样本采集
评估HXZQ对健康成年人肠道微生物组的影响
纳入40名健康成年人,排除近期使用抗生素、微生物制剂等,连续口服HXZQ 10 ml/天共14天,分别在第0、8、15天采集粪便样本进行16S rRNA测序。
Modulatory Effects of Huoxiang Zhengqi Oral Liquid on Gut Microbiome Homeostasis Based on Healthy Adults and Antibiotic-Induced Gut Microbial Dysbiosis Mice Model.
包含健康成人队列的16S rRNA测序分析和抗生素诱导的肠道菌群失调小鼠模型验证,并进行了功能预测、ELISA炎症因子检测和结肠组织HE染色,具有独立证据层级。
健康成人(n=30,亚健康状态n=8) 抗生素诱导的肠道菌群失调小鼠模型(ABX模型)
HXZQ给药剂量:健康成人10 ml/天,连续14天;小鼠1.3 ml/kg,连续7天 抗生素混合物组成:氨苄青霉素1 g/L,万古霉素5 g/L,新霉素三硫酸盐1 g/L,甲硝唑1 g/L 对照组设置:健康成人未设对照组,小鼠设置正常饮水对照组、HXZQ组和ABXHX组 样本采集时间点:健康成人第0、8、15天;小鼠在治疗后 16S rRNA基因测序平台:Illumina MiSeq PE300,V3-V4区
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估HXZQ对健康成年人肠道微生物组的影响
纳入40名健康成年人,排除近期使用抗生素、微生物制剂等,连续口服HXZQ 10 ml/天共14天,分别在第0、8、15天采集粪便样本进行16S rRNA测序。
验证HXZQ对肠道菌群失调的恢复作用
7周龄C57/BL6J小鼠随机分为四组(对照组、ABX组、HXZQ组、ABXHX组),第2周给予抗生素混合物灌胃建立菌群失调模型,第3周给予HXZQ口服液,随后采集粪便、血浆和结肠组织。
分析肠道菌群组成和多样性变化
提取粪便DNA,扩增V3-V4区,在Illumina MiSeq PE300平台测序,基于OTU分析Alpha和Beta多样性,并利用LEfSe、PICRUSt等预测功能。
评估HXZQ对肠道微环境的影响
用HE染色观察结肠组织结构变化;用ELISA检测血浆中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α浓度。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 微生物组测序 | QIAamp快速粪便DNA小提试剂盒 | Omega | -- |
| PCR产物纯化 | AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒 | Axygen | -- |
| 16S rRNA测序 | Illumina MiSeq PE300平台 | Illumina | -- |
| 组织学检测 | 倒置光学显微镜(Olympus IX53) | Olympus | IX53 |
| ELISA | QuantiCyto ELISA试剂盒 | Neobioscience | -- |
| ELISA比色 | 酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 药物处理 | 藿香正气口服液 | Taiji Group | 19072656 |
| 动物实验 | 万古霉素 | -- | -- |
| 新霉素三硫酸盐 | -- | -- | |
| 甲硝唑 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 人群干预 | HXZQ剂量10 ml/天;给药持续时间14天(第0-14天);粪便采集时间点:第0、8、15天;参与者排除标准(3个月内抗生素使用,1个月内微生物制剂使用等) 阅读提示:见Materials and Methods中的Study Design and Participants |
| 小鼠模型 | 小鼠品系C57BL/6J,7周龄;抗生素混合物组成及浓度;给药方式(灌胃);HXZQ剂量1.3 ml/kg;分组(对照组、ABX组、HXZQ组、ABXHX组);每组样本量n=16 阅读提示:见Materials and Methods中的Animals部分 |
| 16S rRNA测序 | DNA提取试剂盒;V3-V4高变区引物序列338F/806R;测序平台Illumina MiSeq PE300;OTU聚类阈值97% 阅读提示:见Materials and Methods中的16S Ribosomal RNA Gene Sequencing and Data Analyses |
| ELISA检测 | 检测指标:IL-1β, IL-6, IL-10, TNF-α;试剂盒来源;血浆样本;波长450 nm 阅读提示:见Materials and Methods中的Enzyme-Linked Immunosorbent Assay |