患者筛选与基线评估
确定符合高脂血症诊断的患者并收集基线数据。
根据2019年ESC指南纳入35例高脂血症患者，排除糖尿病、高血压等疾病，记录年龄、性别、体重和基线血脂水平。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
血浆净化治疗缓解高脂血症对PBMCs的损伤
Plasma Purification Treatment Relieves the Damage of Hyperlipidemia to PBMCs.
实验完整度
中研究涉及患者样本、DFPP治疗、Western blot、FCM、ELISA等实验，但主要基于临床观察，缺乏动物或细胞模型等功能验证，机制研究有限。
主要模型
高脂血症患者外周血单个核细胞(PBMCs) 高脂血症患者队列（35例）
重点核对
患者入选标准：高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高脂血症或高低密度脂蛋白血症 DFPP治疗参数：血浆流量60-100 ml/min，血浆分离率30%，血浆弃除率15%，肝素初始剂量3000 U，维持剂量20-40 U/(kg·h)，每次3-4小时 Western blot检测蛋白：LDLR, CD36, PCSK9, GRP78, CHOP, ATF4, p-EIF2α, Bcl-2, BAX, Caspase-3 ROS检测：DCFHDA荧光探针10 μmol/L，37°C孵育20分钟，流式细胞术488/525 nm激发/发射 ELISA检测血清炎症因子：IL-1β, IL-6, TNF-α
摘要
背景：高脂血症（高胆固醇血症[胆固醇>5.18 mmol/L]或高甘油三酯血症[甘油三酯>2.3 mmol/L]，混合型高脂血症[胆固醇>5.18 mmol/L和甘油三酯>2.3 mmol/L]，以及高低密度脂蛋白血症[低密度脂蛋白(LDL)>3.4 mmol/L]）是动脉粥样硬化和心血管疾病(CVD)的强风险因素。降脂药物治疗常导致许多副作用。本研究旨在探讨非药物疗法双重滤过血浆置换(DFPP)对高脂血症患者血脂清除前后外周血单个核细胞(PBMCs)中脂质代谢、内质网(ER)应激和凋亡相关蛋白的潜在影响。方法：选取35例高脂血症患者。通过Western blot检测脂质代谢[CD36、前蛋白转化酶枯草溶菌素/kexin 9型(PCSK9)和LDL受体]、ER应激[葡萄糖调节蛋白78(Grp78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、激活转录因子4(ATF4)和真核起始因子2α(EIF2α)]及凋亡[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)]相关蛋白，通过流式细胞术(FCM)测定活性氧(ROS)，ELISA检测血清炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]。结果：与DFPP前相比，大多数脂质代谢参数（如胆固醇、甘油三酯、LDL、脂蛋白a[Lp(a)]和小而密LDL(sdLDL)胆固醇）在DFPP后降低。DFPP与脂质代谢、ER应激和凋亡相关蛋白的下调相关，导致ROS和血清炎症因子释放减少。结论：DFPP具有降脂活性，还可以调节高脂血症患者PBMCs中脂质代谢、ER应激和凋亡相关蛋白，并降低炎症因子水平（ClinicalTrials.gov号：NCT03491956）。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- DFPP是否能改善高脂血症患者PBMCs的损伤，即其对脂质代谢、内质网应激和凋亡相关蛋白的影响。
- 核心机制
- 文中未明确说明
- 主要证据
- 35例高脂血症患者接受DFPP治疗，Western blot显示脂质代谢、ER应激和凋亡相关蛋白下调，Bcl-2上调，ROS和炎症因子水平降低。
- 研究意义
- DFPP作为一种非药物治疗，具有降脂活性，可能减少CVD风险，为高脂血症治疗提供新选择，但其长期效果和机制需进一步研究。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
DFPP治疗
实施双重滤过血浆置换以清除血脂。
使用Plasauto iQ系统进行DFPP，采用PE-08和EC-4A20分离器，肝素抗凝，治疗3-4小时。
PBMCs分离与蛋白提取
获取患者PBMCs用于后续检测。
血液样本用酸性枸橼酸葡萄糖抗凝，分离PBMCs，提取蛋白样本。
Western blot检测蛋白表达
检测脂质代谢、ER应激和凋亡相关蛋白的表达变化。
使用Western blot检测PBMCs中LDLR、CD36、PCSK9、GRP78、CHOP、ATF4、p-EIF2α、Bcl-2、BAX和Caspase-3。
流式细胞术检测ROS
评估DFPP对PBMCs中ROS水平的影响。
PBMCs用DCFHDA探针染色，流式细胞仪检测ROS水平。
ELISA检测血清炎症因子
测定DFPP对血清炎症因子水平的影响。
使用商业ELISA试剂盒检测IL-1β、IL-6和TNF-α。
统计分析
比较DFPP前后各指标的变化。
使用配对t检验或Wilcoxon秩和检验分析数据，P<0.05为显著。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 血浆置换治疗 | Plasauto iQ自动血液净化系统 | Kawasumi | KM-9000 |
| PE-08初级膜血浆分离器 | -- | PE-08 | |
| EC-4A20次级膜血浆成分分离器 | -- | EC-4A20 | |
| 抗凝 | 肝素 | -- | -- |
| PBMC分离 | 酸性枸橼酸葡萄糖 | Walvax Biotechnology Co. | -- |
| PBMCs分离液 | Hao Yang Biological Manufacture Co. | -- | |
| Western blot | 裂解液 | Invent | -- |
| PVDF膜 | Millipore | -- | |
| Immobilon Western化学发光HRP底物 | Millipore | -- | |
| Bio-Rad ChemiDoc XRS系统 | Bio-Rad | -- | |
| LDLR抗体 | Proteintech | 10785-1-AP | |
| CD36抗体 | Proteintech | 18836-1-AP | |
| PCSK9抗体 | Proteintech | 55206-1-AP | |
| GRP78抗体 | Proteintech | 11587-1-AP | |
| CHOP抗体 | Proteintech | 15204-1-AP | |
| ATF4抗体 | Proteintech | 10835-1-AP | |
| p-EIF2α抗体 | Proteintech | 28740-1-AP | |
| EIF2α抗体 | Cell Signaling Technology | 9722S | |
| Bcl-2抗体 | Proteintech | 12789-1-AP | |
| BAX抗体 | Proteintech | 50599-2-Ig | |
| Caspase-3抗体 | Proteintech | 19677-1-AP | |
| 羊抗兔IgG | Proteintech | -- | |
| 羊抗鼠IgG | -- | -- | |
| ROS检测 | ROS检测试剂盒 | Beyotime | -- |
| 2',7'-二氯荧光素二乙酸酯 | -- | -- | |
| 流式细胞仪 | BD | -- | |
| ELISA | IL-1β ELISA试剂盒 | Neobioscience | -- |
| IL-6 ELISA试剂盒 | Neobioscience | -- | |
| TNF-α ELISA试剂盒 | Neobioscience | -- | |
| 统计分析 | SPSS 22.0 | IBM | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者筛选 | 纳入标准：高胆固醇血症、高甘油三酯血症、混合型高脂血症或高低密度脂蛋白血症；排除标准：糖尿病、高血压、肿瘤等 阅读提示：Materials and Methods: Study Participants, Exclusion Criteria |
| DFPP治疗参数 | 血流量60-100 ml/min，血浆分离率30%，血浆弃除率15%，肝素剂量，治疗时间3-4小时 阅读提示：Materials and Methods: Treatment Procedure |
| PBMC分离 | 抗凝剂使用，离心速度和时间，洗涤次数 阅读提示：Materials and Methods: Isolation of PBMCs |
| 蛋白检测 | 抗体稀释比，样本量N=5，一抗孵育条件 阅读提示：Materials and Methods: Detection of Lipid Metabolism-, ER Stress-, and Apoptosis-Related Proteins; Figure 1-3 legends |
| ROS检测 | 探针浓度10 μmol/L，孵育20分钟，流式设置 阅读提示：Materials and Methods: Detection of ROS and Serum Inflammatory Factors; Figure 4 legend |
| 炎症因子检测 | 使用商业ELISA试剂盒，检测IL-1β, IL-6, TNF-α 阅读提示：Materials and Methods: Detection of ROS and Serum Inflammatory Factors; Table 2 |