植物材料采集和提取
获得PSE并分析其植物化学成分
采集Pteropyrum scoparium叶,冻干,甲醇提取,测定总酚和总黄酮含量,并进行GC-MS分析。
Broad-Spectrum Hepatoprotection by Pteropyrum scoparium Extract Against Multi-Pesticide Oxidative Stress in Rats.
包含体外植物化学分析(TPC、TFC、GC-MS)、体内动物实验(大鼠模型,十组)、多项生化指标检测(TAC、GSH、MDA、DPPH、8-OHdG、酶活性)和组织病理学验证,功能与机制验证兼备。
Sprague Dawley大鼠模型 Pteropyrum scoparium叶提取物(PSE)
大鼠品系:Sprague Dawley,雄性,约2月龄,体重270±5 g 农药剂量:1 mg/kg/天,腹腔注射,连续30天 PSE剂量:0.1 mg/kg/天,口服 组织病理学评分标准:自定义评分系统(0-3级) 统计方法:单因素方差分析(ANOVA)和Tukey检验
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获得PSE并分析其植物化学成分
采集Pteropyrum scoparium叶,冻干,甲醇提取,测定总酚和总黄酮含量,并进行GC-MS分析。
建立农药诱导的氧化应激模型并评估PSE的保护作用
60只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为10组,每天注射农药(1 mg/kg)和/或口服PSE(0.1 mg/kg),持续30天。
评估氧化应激水平和抗氧化防御状态
检测肝脏匀浆中的TAC、GSH、MDA、DPPH、8-OHdG以及抗氧化酶(CAT、GPx、SOD)活性。
评估肝脏组织学变化并验证生化结果
肝脏组织经甲醛固定、石蜡包埋、HE染色,显微镜下评估充血和炎症评分。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 植物提取 | 冷冻干燥系统 | LABCONCO | -- |
| 电动研磨机 | Impex | -- | |
| 离心机 | Thermo Scientific Heraeus Megafuge 16R | -- | |
| 旋转蒸发仪 | G3 Heidolph | -- | |
| TPC测定 | Folin-Ciocalteu试剂 | -- | -- |
| 碳酸钠 | -- | -- | |
| 酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| GC-MS分析 | 气相色谱仪 | Shimadzu GC-2010 Plus | -- |
| 质谱仪 | Shimadzu GC-MS-QP2010 Ultra | -- | |
| 自动进样器 | Shimadzu AOC-20i | -- | |
| 毛细管柱 | Supelco SP-2560 | -- | |
| 动物实验 | 鱼藤酮 | Molekula | 83-79-4 |
| 噻虫嗪 | Molekula | 153719-23-4 | |
| 玉米油 | -- | -- | |
| 样品处理 | 匀浆器 | IKA ULTRA TURRAX | -- |
| 离心机 | CL30R | -- | |
| 生化分析 | GSH检测试剂盒 | Sigma-Aldrich | CS1020 |
| TAC检测试剂盒 | ELabscience | E-BC-K136-S | |
| MDA检测试剂盒 | Sigma-Aldrich | MAK568 | |
| DNA损伤ELISA试剂盒 | Cell Biolabs | STA-320 | |
| 过氧化氢酶检测试剂盒 | Sigma-Aldrich | CAT100 | |
| 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 | Sigma-Aldrich | CGP1 | |
| 超氧化物歧化酶检测试剂盒 | Sigma-Aldrich | CS0009 | |
| 组织处理 | 切片机 | -- | -- |
| 组织病理学 | 显微镜 | Olympus BX51 | -- |
| 相机 | Olympus DP70 | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 植物提取 | 植物采集地点、冻干条件(-40°C,5天)、甲醇提取条件(10g粉末+100mL甲醇,室温23°C,200rpm,6小时)、离心(6000rpm,4°C,15分钟)、旋转蒸发温度(40°C) 阅读提示:2.1-2.3节 |
| 生化分析 | TPC测定条件(Folin-Ciocalteu试剂、碳酸钠、波长765nm)、TFC测定条件(亚硝酸钠、氯化铝、氢氧化钠、波长510nm)、GC-MS条件(色谱柱、程序升温、离子源温度等) 阅读提示:2.4-2.6节 |
| 动物实验 | 动物品系、年龄、体重、饲养环境(温度22±2°C,湿度60±5%,12小时光暗循环)、随机分组(10组,每组6只)、农药剂量(1mg/kg/天)和PSE剂量(0.1mg/kg/天)的给药方式(腹腔注射和口服)、处理时间(30天) 阅读提示:2.7-2.8节 |
| 生化指标检测 | 组织匀浆制备(2g肝组织+10mL PBS)、总蛋白测定(Lowry法)、GSH、TAC、MDA、DPPH、8-OHdG及酶活性试剂盒的具体操作步骤和波长 阅读提示:2.8.1-2.8.2节 |
| 组织病理学 | 固定、包埋、切片厚度(5μm)、染色(HE)、评分标准(0-3级)、显微镜放大倍数(200×) 阅读提示:2.8.3节 |