样本采集和流行病学调查
收集牛群样本并记录可能的风险因素,以评估环形泰勒虫感染的流行率和相关风险因素。
从达卡利亚省和达米埃塔省的私人农场采集149头牛的血液样本,并通过问卷收集年龄、品种、性别、季节、蜱虫侵扰、怀孕状态、外寄生虫杀灭剂使用频率等数据。
Epidemiological, haematological-biochemical, and molecular investigations of bovine theileriosis with therapeutic evaluation of buparvaquone with silymarin in Dakahlia and Damietta governorates, Egypt.
包含PCR及系统发育分析的分子流行病学调查、风险因素统计分析、临床治疗试验及血液学和生化指标的纵向检测,但未进行体外或动物模型的机制验证。
自然感染环形泰勒虫的牛(包括奶牛和水牛) BVQ和BVQ联合SI治疗组(每组10头临床感染母牛)
PCR检测使用Tams1基因引物,扩增片段721 bp 治疗分组:BVQ(2.5 mg/kg,肌肉注射)单独或联合SI(2.5 mg/kg,肌肉注射) 寄生虫血症评估在治疗前(Day 0)和治疗后14天进行 血液学、生化、急性期蛋白和β-羟丁酸在Day 0和Day 14检测 P值<0.05为统计显著性,使用配对t检验
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
收集牛群样本并记录可能的风险因素,以评估环形泰勒虫感染的流行率和相关风险因素。
从达卡利亚省和达米埃塔省的私人农场采集149头牛的血液样本,并通过问卷收集年龄、品种、性别、季节、蜱虫侵扰、怀孕状态、外寄生虫杀灭剂使用频率等数据。
通过分子方法确认环形泰勒虫感染并分析其遗传特征。
使用QIAamp DNA Mini Kit提取DNA,通过Tams1基因引物进行PCR扩增,产物经测序后构建系统发育树,并与GenBank中的序列比对。
比较布帕伐醌单药与布帕伐醌联合水飞蓟素对牛泰勒虫病的治疗效果。
20头PCR确认感染的牛随机分为两组(每组10头),分别接受BVQ或BVQ+SI治疗,在Day 0和Day 14评估寄生虫血症、血液学和生化参数。
评估治疗前后牛血液学、肝肾功能、代谢和急性期蛋白的变化。
使用自动分析仪和ELISA试剂盒检测RBC、WBC、Hb、PCV、ALT、AST、GGT、ALKP、总胆红素、尿素、肌酐、葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、β-羟丁酸、急性期蛋白(α1-AGP、HP)和PON-1。
分析感染风险因素和治疗前后参数的显著性。
使用SPSS V20.0进行Shapiro-Wilk检验、配对t检验和单变量及多变量二元逻辑回归分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 血液采集 | VACUETTE®采血管 | Greiner Bio-One GmbH | -- |
| 含促凝剂的真空采血管 | VACUETTE®, Greiner Bio-One | -- | |
| 血液学检测 | Drabkin氏试剂 | VITRO SCIENT | REF# 1701 |
| 生化检测 | ALT试剂盒 | AGAPPE® | 51409002 |
| AST试剂盒 | AGAPPE® | 51408002 | |
| γ-谷氨酰转移酶试剂盒 | AGAPPE® | 51416002 | |
| 碱性磷酸酶试剂盒 | AGAPPE® | 51401002 | |
| 总胆红素试剂盒 | AGAPPE® | 51003002 | |
| 尿素试剂盒 | AGAPPE® | 51412002 | |
| 肌酐试剂盒 | AGAPPE® | 51009001 | |
| 葡萄糖试剂盒 | AGAPPE® | 51406001 | |
| 胆固醇试剂盒 | AGAPPE® | 51204002 | |
| 甘油三酯试剂盒 | AGAPPE® | 51410005 | |
| β-羟丁酸检测试剂盒 | Elabscience® | E-BC-K785-M | |
| 急性期蛋白检测 | α1-酸性糖蛋白ELISA试剂盒 | Hoelzel Diagnostika® | CSB-E13213G |
| 触珠蛋白ELISA试剂盒 | Hoelzel Diagnostika® | CSB-E08579b | |
| DNA提取 | QIAamp DNA Mini Kit | Qiagen | -- |
| PCR | Emerald Amp GT PCR预混液 | -- | -- |
| T100热循环仪 | Bio-Rad | -- | |
| 琼脂糖凝胶电泳 | 溴化乙锭 | Himedia | -- |
| Gel Doc EZ凝胶成像系统 | Bio-Rad | -- | |
| DNA测序 | QIAquick PCR产物纯化试剂盒 | Qiagen | 28104 |
| BigDye Terminator V3.1循环测序试剂盒 | Perkin-Elmer | 4336817 | |
| Applied Biosystems 3130遗传分析仪 | HITACHI | -- | |
| Centrisep离心柱 | -- | CS-901 | |
| 显微镜检查 | OPTIKA B-380光学显微镜 | OPTIKA | -- |
| 离心 | REMI冷冻离心机C-24BL | REMI | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本采集 | 样本量:149头牛;采集时间:2023年8月至2024年9月;血液样本采集自尾静脉,使用EDTA抗凝管和促凝管;运输条件:冰盒内,12小时内送达实验室。 阅读提示:Methods: Sample collection and processing |
| 分子检测 | PCR引物序列:Tams1-F GTAACCTTTAAAAACGT,Tams1-R GTTACGAACATGGGTTT;扩增片段721 bp;PCR反应体系:12.5 μl Emerald Amp GT PCR mastermix, 1 μL各引物, 5 μl模板DNA, 5.5 μl水;PCR条件:94°C 5分钟,35个循环(94°C 30秒,55°C 40秒,72°C 45秒),72°C 10分钟。 阅读提示:Methods: DNA extraction and amplification |
| 治疗试验 | 治疗组:BVQ单药(2.5 mg/kg,肌注)和BVQ+SI(2.5 mg/kg,肌注);每组10头;治疗周期14天;纳入标准:未接受其他治疗、单纯感染T. annulata、临床稳定;排除标准:缺乏完整数据、怀孕分娩、使用其他药物。 阅读提示:Methods: Treatment trial |
| 寄生虫血症评估 | 血涂片制备:EDTA抗凝血,吉姆萨染色(10%浓度,染色10-15分钟);计数50个高倍视野(100X油镜);计算感染红细胞百分比。 阅读提示:Methods: Erythrocyte infection intensity (Parasitaemia %) |
| 血液学和生化检测 | 检测时间点:治疗前(Day 0)和治疗后14天;血液学参数:RBC、WBC、Hb、PCV、MCV、MCH、MCHC;生化参数:ALT、AST、GGT、ALKP、总胆红素、尿素、肌酐、葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、β-羟丁酸、总蛋白、白蛋白、球蛋白、PON-1。试剂盒品牌和货号详见Methods。 阅读提示:Methods: Hematological profile, Serum metabolic status parameters, Proteinogram |