埃及达卡利亚省和达米埃塔省牛泰勒虫病的流行病学、血液学-生化及分子研究及布帕伐醌与水飞蓟素联合治疗的疗效评估

Epidemiological, haematological-biochemical, and molecular investigations of bovine theileriosis with therapeutic evaluation of buparvaquone with silymarin in Dakahlia and Damietta governorates, Egypt.

作者信息Mohamed Gamal Alnahass, Ahmed Magdy Selim, Mohamed El-Diasty, Ahmed Mohamed El-Sebaey, Elzahara Elbaz
PMID41824240
发布时间2026-03-13
DOI10.1007/s11259-026-11089-4

实验完整度

包含PCR及系统发育分析的分子流行病学调查、风险因素统计分析、临床治疗试验及血液学和生化指标的纵向检测,但未进行体外或动物模型的机制验证。

主要模型

自然感染环形泰勒虫的牛(包括奶牛和水牛) BVQ和BVQ联合SI治疗组(每组10头临床感染母牛)

重点核对

PCR检测使用Tams1基因引物,扩增片段721 bp 治疗分组:BVQ(2.5 mg/kg,肌肉注射)单独或联合SI(2.5 mg/kg,肌肉注射) 寄生虫血症评估在治疗前(Day 0)和治疗后14天进行 血液学、生化、急性期蛋白和β-羟丁酸在Day 0和Day 14检测 P值<0.05为统计显著性,使用配对t检验

摘要

历史:牛泰勒虫病由环形泰勒虫引起,通过璃眼蜱传播,是埃及牛健康和生产力的一大制约因素,导致经济损失。目的:本研究确定达卡利亚省和达米埃塔省牛中环形泰勒虫的分子流行率,评估相关风险因素,并评估感染动物的血液学和生化变化。还研究了布帕伐醌(BVQ)单独或联合水飞蓟素(SI)的治疗效果。方法:采集149头牛的血液样本;通过Tams1基因PCR和系统发育分析确认感染。统计评估风险因素。将20头临床感染母牛分为两组(n = 10);一组接受BVQ,另一组接受BVQ联合SI。在治疗前和治疗后两周测量血液学、生化、急性期蛋白和β-羟丁酸。结果:PCR分析确认32.9%的牛感染环形泰勒虫,我们的分离株(PQ137836和PQ137837)与本地和全球菌株的序列相似性为99.7-100%。在受蜱侵扰的牛(69.84%,OR = 5.62)、怀孕母牛(50%,OR = 6.7)和未使用外寄生虫杀灭剂治疗的动物(91.8%,OR = 8.6)中感染率最高。与单独使用BVQ相比,联合治疗显著降低了寄生虫血症(3.76%至0.18%,p < 0.001),改善了血液学、肝脏和代谢指标,降低了急性期蛋白,并增加了对氧磷酶-1活性。结论:牛泰勒虫病在达卡利亚省和达米埃塔省高度流行,尤其是在夏季的成年、怀孕和受蜱侵扰的牛中。分子分析确认了环形泰勒虫感染。BVQ联合SI的联合治疗比BVQ单药治疗更有效。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
环形泰勒虫在埃及达卡利亚省和达米埃塔省的分子流行率及其相关风险因素,以及布帕伐醌联合水飞蓟素治疗是否比单药更有效。
核心机制
环形泰勒虫感染导致牛只血液学紊乱、肝肾功能损伤和代谢失调,联合使用水飞蓟素可能通过其肝保护、抗氧化和免疫调节特性增强布帕伐醌的疗效,促进寄生虫清除和肝功能恢复。
主要证据
基于PCR和系统发育分析确认感染,风险因素分析显示季节、怀孕、蜱虫存在和未使用外寄生虫杀灭剂是显著风险因素;治疗试验显示联合治疗显著降低寄生虫血症并改善血液学和生化指标,优于单药治疗。
研究意义
研究结果有助于制定综合控制策略,包括有效蜱管理、优化饲养实践、分子诊断和循证联合治疗,以减少疾病流行、减轻经济损失并改善动物健康、福利和生产力。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

样本采集和流行病学调查

收集牛群样本并记录可能的风险因素,以评估环形泰勒虫感染的流行率和相关风险因素。

从达卡利亚省和达米埃塔省的私人农场采集149头牛的血液样本,并通过问卷收集年龄、品种、性别、季节、蜱虫侵扰、怀孕状态、外寄生虫杀灭剂使用频率等数据。

2

PCR和系统发育分析

通过分子方法确认环形泰勒虫感染并分析其遗传特征。

使用QIAamp DNA Mini Kit提取DNA,通过Tams1基因引物进行PCR扩增,产物经测序后构建系统发育树,并与GenBank中的序列比对。

3

治疗试验和寄生虫血症评估

比较布帕伐醌单药与布帕伐醌联合水飞蓟素对牛泰勒虫病的治疗效果。

20头PCR确认感染的牛随机分为两组(每组10头),分别接受BVQ或BVQ+SI治疗,在Day 0和Day 14评估寄生虫血症、血液学和生化参数。

4

血液学和生化检测

评估治疗前后牛血液学、肝肾功能、代谢和急性期蛋白的变化。

使用自动分析仪和ELISA试剂盒检测RBC、WBC、Hb、PCV、ALT、AST、GGT、ALKP、总胆红素、尿素、肌酐、葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、β-羟丁酸、急性期蛋白(α1-AGP、HP)和PON-1。

5

统计分析

分析感染风险因素和治疗前后参数的显著性。

使用SPSS V20.0进行Shapiro-Wilk检验、配对t检验和单变量及多变量二元逻辑回归分析。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
VACUETTE®采血管Greiner Bio-One GmbH--
含促凝剂的真空采血管VACUETTE®, Greiner Bio-One--
Drabkin氏试剂VITRO SCIENTREF# 1701
ALT试剂盒AGAPPE®51409002
AST试剂盒AGAPPE®51408002
γ-谷氨酰转移酶试剂盒AGAPPE®51416002
碱性磷酸酶试剂盒AGAPPE®51401002
总胆红素试剂盒AGAPPE®51003002
尿素试剂盒AGAPPE®51412002
肌酐试剂盒AGAPPE®51009001
葡萄糖试剂盒AGAPPE®51406001
胆固醇试剂盒AGAPPE®51204002
甘油三酯试剂盒AGAPPE®51410005
β-羟丁酸检测试剂盒Elabscience®E-BC-K785-M
α1-酸性糖蛋白ELISA试剂盒Hoelzel Diagnostika®CSB-E13213G
触珠蛋白ELISA试剂盒Hoelzel Diagnostika®CSB-E08579b
QIAamp DNA Mini KitQiagen--
Emerald Amp GT PCR预混液----
T100热循环仪Bio-Rad--
溴化乙锭Himedia--
Gel Doc EZ凝胶成像系统Bio-Rad--
QIAquick PCR产物纯化试剂盒Qiagen28104
BigDye Terminator V3.1循环测序试剂盒Perkin-Elmer4336817
Applied Biosystems 3130遗传分析仪HITACHI--
Centrisep离心柱--CS-901
OPTIKA B-380光学显微镜OPTIKA--
REMI冷冻离心机C-24BLREMI--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
样本采集
样本量:149头牛;采集时间:2023年8月至2024年9月;血液样本采集自尾静脉,使用EDTA抗凝管和促凝管;运输条件:冰盒内,12小时内送达实验室。
阅读提示:Methods: Sample collection and processing
分子检测
PCR引物序列:Tams1-F GTAACCTTTAAAAACGT,Tams1-R GTTACGAACATGGGTTT;扩增片段721 bp;PCR反应体系:12.5 μl Emerald Amp GT PCR mastermix, 1 μL各引物, 5 μl模板DNA, 5.5 μl水;PCR条件:94°C 5分钟,35个循环(94°C 30秒,55°C 40秒,72°C 45秒),72°C 10分钟。
阅读提示:Methods: DNA extraction and amplification
治疗试验
治疗组:BVQ单药(2.5 mg/kg,肌注)和BVQ+SI(2.5 mg/kg,肌注);每组10头;治疗周期14天;纳入标准:未接受其他治疗、单纯感染T. annulata、临床稳定;排除标准:缺乏完整数据、怀孕分娩、使用其他药物。
阅读提示:Methods: Treatment trial
寄生虫血症评估
血涂片制备:EDTA抗凝血,吉姆萨染色(10%浓度,染色10-15分钟);计数50个高倍视野(100X油镜);计算感染红细胞百分比。
阅读提示:Methods: Erythrocyte infection intensity (Parasitaemia %)
血液学和生化检测
检测时间点:治疗前(Day 0)和治疗后14天;血液学参数:RBC、WBC、Hb、PCV、MCV、MCH、MCHC;生化参数:ALT、AST、GGT、ALKP、总胆红素、尿素、肌酐、葡萄糖、胆固醇、甘油三酯、β-羟丁酸、总蛋白、白蛋白、球蛋白、PON-1。试剂盒品牌和货号详见Methods。
阅读提示:Methods: Hematological profile, Serum metabolic status parameters, Proteinogram