中性粒细胞胞外诱捕网在创伤性脑损伤后调控坏死性凋亡的功能与机制研究

目的：创伤性脑损伤（TBI）仍然是全球主要的公共卫生挑战，具有高发病率和死亡率，以神经炎症、脑水肿和神经元死亡为特征的继发性损伤是决定患者预后的关键因素。中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）和坏死性凋亡参与TBI病理过程，但它们的相互作用仍不清楚。在此，我们使用NETs抑制剂（Cl‐amidine和DNase I）和坏死性凋亡抑制剂Necrostatin‐1（Nec‐1）来研究NETs和坏死性凋亡在TBI后神经元损伤中的作用。方法：雄性C57BL/6J小鼠通过控制性皮质撞击（CCI）建立TBI模型。给予Cl‐amidine、DNase I和Necrostatin‐1以探讨NETs调节坏死性凋亡并加重TBI诱导的继发性损伤的机制。本研究进行了改良神经功能严重程度评分（mNSS）评估、脑水肿测量、酶联免疫吸附测定（ELISA）、Western blotting、免疫荧光染色和TUNEL染色。小鼠在TBI后1、3、5和7天被处死，由于NETs标志物髓过氧化物酶（MPO）和肽基精氨酸脱亚氨酶4（PAD4）的表达达到峰值，TBI后第3天被指定为主要分析的关键时间点。结果：我们的结果表明，TBI诱导损伤侧皮质中MPO和PAD4的时间依赖性上调。抑制NETs或阻断坏死性凋亡显著减少了神经元凋亡，减轻了脑水肿，改善了mNSS评分，保持了血脑屏障完整性，并降低了促炎细胞因子（TNF‐α、IL‐1β）的水平。Western blot分析显示，TBI显著上调RIP1、RIP3、MLKL及其磷酸化形式的表达，而NETs抑制则下调这些坏死性凋亡相关蛋白。值得注意的是，NETs和坏死性凋亡的联合抑制对TBI诱导的脑损伤未产生协同保护作用。结论：NETs部分通过激活坏死性凋亡通路加重TBI诱导的继发性脑损伤。抑制NETs发挥神经保护作用。靶向NETs可能作为改善TBI患者预后的有前景的治疗策略。