建立AD动物模型并分组给药
构建D-半乳糖诱导的AD大鼠模型，并评估DSS的干预效果。
40只雄性SD大鼠随机分为5组，除对照组外，腹腔注射D-半乳糖（100 mg/kg/天）8周诱导AD模型，从第5周开始灌胃给予低剂量DSS（12 g/kg/天）、高剂量DSS（24 g/kg/天）或多奈哌齐（0.5 mg/kg/天），连续4周。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
当归芍药散通过抑制JAK2/STAT3通路和调节Th17/Treg相关免疫失调改善D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病大鼠模型的神经炎症
Danggui Shaoyao San ameliorates neuroinflammation in a D-galactose-induced Alzheimer's disease rat model by suppressing the JAK2/STAT3 pathway and modulating Th17/Treg -related immune dysregulation.
实验完整度
高包含体内动物模型、行为学、组织学、分子生物学、流式细胞术、代谢组学及网络药理学等多层级验证，且明确进行功能与机制验证。
主要模型
D-半乳糖诱导的AD大鼠模型（Sprague-Dawley大鼠） 脾脏CD4+ T细胞亚群 海马组织
重点核对
DSS给药剂量：低剂量12 g/kg/天，高剂量24 g/kg/天（生药材），灌胃给药，从第5周开始持续4周 AD模型建立：D-半乳糖100 mg/kg/天腹腔注射，持续8周 行为学测试样本量：每组5只大鼠（n=5） 分子生物学检测样本量：每组3只大鼠（n=3） 多奈哌齐阳性对照剂量：0.5 mg/kg/天
摘要
目的：本研究探讨当归芍药散（DSS）这种传统中药方剂的治疗潜力，重点关注其对Th17/Treg相关免疫调节和JAK2/STAT3信号通路的影响。方法：将40只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为五组：对照组、AD模型组、低剂量DSS组（12 g/kg/天，生药材）、高剂量DSS组（24 g/kg/天，生药材）和多奈哌齐组（0.5 mg/kg/天）。通过腹腔注射D-半乳糖（100 mg/kg/天）连续8周建立AD模型。采用行为学测试、流式细胞术、生化检测、组织学分析、qPCR和Western blotting评估DSS的作用。非靶向代谢组学分析了代谢变化，网络药理学和分子对接整合用于预测关键靶点和通路。结果：DSS治疗显著减轻了AD大鼠的神经元损伤，抑制了神经炎症，并改善了学习记忆缺陷。此外，DSS与大脑和外周Th17和Treg相关免疫失调的改变有关。血清代谢组学鉴定出脂质代谢和氨基酸代谢通路的紊乱。网络药理学和实验验证表明，DSS通过抑制JAK2和STAT3磷酸化，减少其核转位，从而抑制Th17分化和促炎细胞因子产生，发挥其抗神经炎症作用。结论：DSS是AD治疗的有前途的候选药物，其神经保护和认知增强特性通过免疫调节和JAK2/STAT3通路抑制介导。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 当归芍药散是否能通过调节Th17/Treg相关免疫平衡和抑制JAK2/STAT3信号通路来改善D-半乳糖诱导的AD大鼠模型的神经炎症和认知功能？
- 核心机制
- DSS通过抑制JAK2和STAT3磷酸化，减少其核转位，进而抑制Th17分化和促炎细胞因子产生，同时调节Th17/Treg平衡，减轻神经炎症。
- 主要证据
- DSS处理显著改善了AD大鼠的学习记忆能力（MWM测试）和自发活动（OFT），减轻了海马神经元损伤（HE和Nissl染色），抑制了小胶质细胞活化（Iba1免疫荧光），降低了促炎因子（IL-6、IL-1β、IL-17A）并升高了抗炎因子（TGF-β、IL-4、IL-10）的mRNA水平；流式细胞术显示DSS恢复了脾脏Th17/Treg比例，Western blot和免疫荧光/免疫组化证实DSS抑制了p-JAK2和p-STAT3的表达。
- 研究意义
- DSS是AD治疗的有前途的候选药物，其通过免疫调节和JAK2/STAT3通路抑制发挥神经保护和认知增强作用，体现了中药复方多成分、多靶点、多通路协同调节的特点。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
行为学测试评估认知功能
评估DSS对AD大鼠学习记忆能力和自发活动的影响。
采用Morris水迷宫（MWM）测试空间学习和记忆能力，包括5天训练期和探针试验；采用旷场实验（OFT）评估自发活动和焦虑样行为。
组织学染色评估神经元损伤
观察DSS对AD大鼠海马神经元形态和结构损伤的影响。
取脑组织固定、包埋、切片，进行HE染色和Nissl染色，观察海马CA2和CA3区神经元排列、核形态和Nissl小体分布。
检测神经炎症和突触蛋白表达
评估DSS对AD大鼠神经炎症反应和突触损伤的影响。
通过免疫荧光检测Iba1+活化小胶质细胞；Western blot检测PSD95和突触素I蛋白表达；RT-qPCR检测促炎细胞因子（IL-6、IL-1β、IL-17A）和抗炎细胞因子（TGF-β、IL-4、IL-10）mRNA水平。
网络药理学和代谢组学分析
预测DSS抗神经炎症的潜在靶点和通路，并分析代谢变化。
通过网络药理学筛选DSS活性成分和潜在靶点，构建PPI网络和KEGG通路富集分析；进行非靶向血清代谢组学分析，鉴定差异代谢物和相关代谢通路。
流式细胞术分析外周Th17/Treg平衡
评估DSS对AD大鼠外周免疫细胞Th17/Treg亚群比例的影响。
取脾脏制备单细胞悬液，表面染色CD4，胞内染色Foxp3和IL-17A，流式细胞术检测CD4+IL-17A+ Th17细胞和CD4+Foxp3+ Treg细胞比例；ELISA检测血清IL-17A和IL-10水平。
检测中枢Th17/Treg相关分子表达
评估DSS对大脑海马区Th17/Treg相关转录因子和细胞因子的影响。
通过RT-qPCR和Western blot检测海马组织中RORγt和Foxp3的mRNA和蛋白表达；免疫荧光检测IL-17A和Foxp3阳性细胞。
验证JAK2/STAT3通路抑制
验证DSS是否通过抑制JAK2/STAT3信号通路发挥抗炎作用。
Western blot检测海马组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表达；免疫荧光检测p-JAK2，免疫组化检测p-STAT3在海马CA2区的表达。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 阳性对照药物 | 盐酸多奈哌齐 | MCE | #HY-B0034 |
| AD模型建立 | D-半乳糖 | Sigma-Aldrich | #V900922 |
| Western blot | STAT3抗体 | Proteintech | #102532-AP |
| Foxp3抗体 | Proteintech | #22228-1-AP | |
| ROR-γt抗体 | HUABIO | #HA722121 | |
| p-STAT3-Y705抗体 | HUABIO | #ET1603-40 | |
| JAK2抗体 | Aifang | #AFRM99330 | |
| p-JAK2-Y1007/1008抗体 | ABclonal | #AP0531 | |
| β-肌动蛋白抗体 | Affinity Biosciences | #AF7018 | |
| PSD95抗体 | abcam | #ab18258 | |
| 突触素I抗体 | abcam | #ab254349 | |
| 二抗 | Elabscience | #E-AB-1003 | |
| 免疫荧光 | Iba1抗体 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | #011-27991 |
| RT-qPCR | 逆转录试剂盒 | Novoprotein | #E047-01B |
| SYBR Mixture预混液 | Comwin Biotech | #CW3008M | |
| Western blot | RIPA蛋白裂解液 | Comwin Biotech | #CW2333S |
| ELISA | ELISA试剂盒 | Jianglai Biotechnology | #JL13427, #JL20880 |
| Western blot | BCA蛋白浓度测定试剂盒 | Elabscience Biotechnology | #E-BC-K318-M |
| RNA提取 | TRIzol试剂 | Thermo Fisher Scientific | #15596-026 |
| 免疫荧光 | SlowFade™ Gold抗淬灭封片剂（含DAPI） | Thermo Fisher Scientific | #S36942 |
| 驴抗山羊Alexa Fluor 647荧光二抗 | Thermo Fisher Scientific | #A32849 | |
| 免疫组化 | 通用两步法检测试剂盒 | Zhongshan Golden Bridge | #PV-9000 |
| Nissl染色 | 甲苯胺蓝 | Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | #G3663 |
| 免疫荧光 | Triton X-100 | Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | #T8200 |
| 含DAPI的抗淬灭封片剂 | Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | #S2110 | |
| HE染色 | 伊红染色液 | Zhongshan Golden Bridge Biotechnology Co., Ltd. | #ZLI-9613 |
| 中药制备 | 当归 | -- | #CK25111301 |
| 芍药 | -- | #HH25111401 | |
| 白术 | -- | #CK25110302 | |
| 茯苓 | -- | #HH25111101 | |
| 泽泻 | -- | #HH25110505 | |
| 川芎 | -- | #HH25102701 |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | D-半乳糖剂量：100 mg/kg/天，腹腔注射，持续8周；动物品系：雄性Sprague-Dawley大鼠，6-8周龄，SPF级 阅读提示：Materials and methods 2.1 Animals 和 2.4 Animal grouping and treatment |
| 药物干预 | DSS低剂量：12 g/kg/天（0.9 mL/天浓缩提取物），高剂量：24 g/kg/天（1.8 mL/天），灌胃给药，从第5周开始持续4周；多奈哌齐剂量：0.5 mg/kg/天 阅读提示：Materials and methods 2.4 Animal grouping and treatment |
| 行为学测试 | MWM和OFT的样本量：每组5只；MWM训练时间：5天，每天4次，最长游泳时间60秒；OFT测试时间：5分钟 阅读提示：Materials and methods 2.5 Open field test 和 2.6 Morris water maze test |
| 分子生物学检测 | 每组n=3；Western blot蛋白上样量30 μg；RT-qPCR以β-actin为内参，2^-ΔΔCt法 阅读提示：Materials and methods 2.12 RT-qPCR analysis 和 2.13 Western blot |
| 流式细胞术 | 脾脏CD4+ T细胞亚群分析；染色方案：CD4表面染色，Foxp3和IL-17A胞内染色 阅读提示：Materials and methods 2.17 Flow cytometry |