样本采集与固定
获取肝组织样本并进行适当固定以保持形态学和线粒体结构。
从5只兔子采集肝组织样本,分为两半,分别用10%缓冲福尔马林和Kolster固定液固定,常规石蜡包埋,切片厚度3-5μm。
Beyond IHC Stain: Mitochondria as a Histochemical Biomarker for Apoptosis Detection in Hepatic Tissue Sections.
包含体外组织学染色、免疫组化和定量统计分析,但仅使用兔肝组织样本,缺乏功能验证或机制验证。
兔肝组织切片
样本来源:5只兔子的肝组织,无肉眼可见肝病变 固定和染色:10%缓冲福尔马林固定用于H&E、GT和IHC;Kolster固定液用于HIH染色 抗体:Cleaved Caspase-3 (Asp 175) (5A1E),稀释度1:2000 凋亡评估方法:200个细胞中计数凋亡肝细胞百分比;50个连续高倍镜视野(400×)计数凋亡细胞数
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取肝组织样本并进行适当固定以保持形态学和线粒体结构。
从5只兔子采集肝组织样本,分为两半,分别用10%缓冲福尔马林和Kolster固定液固定,常规石蜡包埋,切片厚度3-5μm。
通过常规染色观察肝组织形态和凋亡特征。
对福尔马林固定的切片进行H&E和Goldner三色染色,对Kolster固定切片进行Heidenhain铁苏木精染色。
通过检测caspase-3表达来识别凋亡细胞。
对福尔马林固定的3μm切片进行IHC,使用Cleaved Caspase-3抗体,经抗原修复、封闭、一抗孵育、二抗检测和DAB显色。
比较不同染色方法检测凋亡肝细胞的灵敏度。
使用两种计数方法评估凋亡肝细胞百分比或数量,并进行统计分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 组织切片制备 | 徕卡RM2125旋转切片机 | Leica | RM2125 |
| 免疫组化 | Cleaved Caspase-3 (Asp 175) (5A1E) | CellSignal | -- |
| 2步Plus Poly-HRP抗兔/小鼠IgG检测系统 | Elabscience | -- | |
| DAB溶液 | Elabscience | -- | |
| 样品观察 | 奥林巴斯BX-41光学显微镜 | Olympus | BX-41 |
| 显微摄影 | 奥林巴斯SC180数码相机 | Olympus | SC180 |
| 图像分析 | CellSens Entry 3.1 | Olympus | 3.1 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本采集与固定 | 兔子数量为5,无肝脏病变;固定液种类及切片厚度 阅读提示:Material and Methods 2.1, 2.2.1 |
| 组织学染色 | H&E和GT染色步骤;HIH染色固定液、染液配制、染色时间 阅读提示:Material and Methods 2.2.2 |
| 免疫组织化学 | 抗体类型、稀释度、孵育时间、抗原修复条件 阅读提示:Material and Methods 2.2.2 |
| 凋亡细胞定量与统计 | 计数方法、视野数、放大倍数、统计检验方法 阅读提示:Material and Methods 2.2.4, 2.2.5 |