丝氨酸剂量筛选
确定最优丝氨酸补充水平
在正常饲喂条件下,将35头断奶仔猪分为5组,分别饲喂含0%、0.25%、0.50%、0.75%和1.00%丝氨酸的基础日粮,持续42天,记录生长性能并检测血清免疫指标。
Dietary serine supplementation improves growth performance and intestinal immunity and modulates gut microbiota in chronic oxidative stress-induced weaned piglets.
包含剂量筛选实验、慢性应激模型建立、组织形态学、血清免疫指标、基因和蛋白表达分析、16S rRNA测序及相关性分析等多层级验证。
断奶仔猪(Duroc × Landrace × Yorkshire) D-半乳糖诱导的慢性氧化应激断奶仔猪模型
丝氨酸补充剂量1.00% D-半乳糖口服剂量10 g/kg BW 实验周期28天 仔猪分组(Ctrl、D-Gal、Ser) 每组样本量n=7
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
确定最优丝氨酸补充水平
在正常饲喂条件下,将35头断奶仔猪分为5组,分别饲喂含0%、0.25%、0.50%、0.75%和1.00%丝氨酸的基础日粮,持续42天,记录生长性能并检测血清免疫指标。
建立D-半乳糖诱导的慢性氧化应激断奶仔猪模型,并评估丝氨酸补充的效果
将21头断奶仔猪分为对照组、模型组和丝氨酸处理组,模型组和丝氨酸处理组每天口服D-半乳糖(10 g/kg BW),丝氨酸处理组另补充1.00%丝氨酸,持续28天,检测生长性能、肠道形态和血清参数。
评估丝氨酸对肠道屏障功能和免疫应答的影响
采集肠道组织样本,进行H&E染色观察形态,测量绒毛高度和隐窝深度;用ELISA检测血清和肠道分泌型免疫球蛋白水平。
探究丝氨酸对肠道紧密连接、自噬和NF-κB信号通路相关基因和蛋白表达的影响
提取回肠组织RNA和蛋白质,通过RT-qPCR检测紧密连接基因(ZO-1)和自噬相关基因(beclin、LC3b-1、Ep2c、P62)的mRNA表达,通过Western blot检测p-NF-κBp65和ATF4的蛋白表达。
评估丝氨酸对肠道微生物多样性和组成的影响
收集回肠食糜样本,提取微生物DNA,扩增16S rRNA V3-V4区并进行高通量测序,分析多样性和物种组成,并进行相关性和功能预测分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 日粮配制 | 丝氨酸 | Hubei Huntide Biotech Co., Ltd. | -- |
| 模型诱导 | D-半乳糖 | Hubei DeAnTe Chemical Co., Ltd. | -- |
| 血清参数测定 | BCA蛋白测定试剂盒 | Thermo Fisher Scientific Inc. | 23225 |
| 白蛋白测定试剂盒 | Abcam Plc | ab235628 | |
| 血清肌酐比色检测试剂盒 | Invitrogen | EIASCR | |
| ELISA | 猪特异性IgA ELISA试剂盒 | Abcam Plc | ab190536 |
| IgG ELISA试剂盒 | Thermo Fisher Scientific Inc. | 88-50400-88 | |
| IgM ELISA试剂盒 | Thermo Fisher Scientific Inc. | 88-50470-88 | |
| SIgA ELISA试剂盒 | Biomatik | EKU08429 | |
| SIgG ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology Inc. | E-EL-PG1823 | |
| SIgM ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology Inc. | E-EL-PG1851 | |
| RT-qPCR | 逆转录试剂盒 | Takara Biomedical Technology Co., Ltd. | 6210A/B |
| SYBR Premix Ex Taq | Takara Biomedical Technology Co., Ltd. | RR420A | |
| Western blotting | 抗ATF4抗体 | Abcam Plc | ab23760 |
| 抗磷酸化NF-κBp65抗体 | Proteintech Group | 3033 | |
| 抗β-肌动蛋白抗体 | Proteintech Group | 66009-1-Ig | |
| 微生物组分析 | QIAamp DNA粪便微型试剂盒 | QIAGEN GmbH | 51504 |
| 仪器设备 | 酶标仪 | Molecular Devices | SpectraMax iD5 |
| 实时荧光定量PCR仪 | Bio-Rad Laboratories Inc. | CFX96 | |
| NanoDrop 2000分光光度计 | Thermo Fisher Scientific Inc. | 2000 | |
| Illumina MiSeq平台 | Illumina Inc. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物分组与处理 | 仔猪品种、初始体重、日龄、每组样本量、丝氨酸剂量、D-半乳糖剂量和给药方式 阅读提示:Materials and methods, Section 2.2 |
| 日粮组成 | 基础日粮配方、低蛋白设计、丝氨酸含量(0.59%) 阅读提示:Materials and methods, Table 1 |
| 肠道形态分析 | 组织固定方法、切片厚度、染色方法、测量软件和放大倍数 阅读提示:Materials and methods, Section 2.5 |
| 血清和肠道免疫指标检测 | ELISA试剂盒的具体货号、检测重复次数、测量波长 阅读提示:Materials and methods, Section 2.6 |
| 基因和蛋白表达分析 | 引物序列、PCR条件、抗体稀释比例、内参基因 阅读提示:Materials and methods, Section 2.7, 2.8; Table 2 |
| 微生物组分析 | DNA提取试剂盒、16S rRNA扩增引物、测序平台、生物信息学分析流程 阅读提示:Materials and methods, Section 2.9 |