建立联合帕金森病模型
模拟PD的多因素病因和关键病理特征，包括α-突触核蛋白聚集和神经炎症。
通过立体定位手术向右侧黑质致密部注射乳酸菌素（LAC），3天后腹腔注射LPS，建立联合模型。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
副干酪乳杆菌发酵亚种U-21在Wistar大鼠帕金森病联合模型中调节行为、生化、免疫调节和转录谱的研究。
Modulation of Behavioral, Biochemical, Immunomodulatory, and Transcriptional Profiles by the Strain Limosilactobacillus fermentum U-21 in Combined Model of Parkinson's Disease in Wistar Rats.
实验完整度
高包含体外细菌培养、体内动物模型（行为学、组织化学、转录、生化和免疫学检测）等多个独立证据层级，且有功能验证（行为学）和机制探讨。
主要模型
Wistar大鼠模型（联合LPS和乳酸菌素诱导） 副干酪乳杆菌U-21菌株
重点核对
LAC剂量：4 μg在3 μL盐水中，单侧注射入右侧黑质致密部（AP = −4.8 mm, L = 2.2 mm, V = 8.0 mm） LPS剂量：1 mg/kg，腹腔注射，每周两次，持续四周，共8次 LfU21给药：1.5 × 10^10 CFU/3 mL，每日口服0.3 mL 动物分组：8组，每组9-11只，共82只 检测时间点：行为学在术后8周，终点分析在术后2个月
摘要
由于目前尚无治愈帕金森病的方法，基于能够产生药理活性化合物的肠道微生物群的药物生物制剂方法正在开发中。在本研究中，我们提出LfU21，来源于副干酪乳杆菌发酵亚种U-21，作为候选药物生物制剂。为了评估其疗效，在Wistar大鼠中建立了联合LPS和乳酸菌素（LAC）诱导的帕金森病模型。使用行为、生化、免疫调节和转录组学生物标志物评估效果。LfU21给药降低了α-突触核蛋白水平，改变了“Rung ladder”测试中的运动表现，并调节了左右纹状体中bdnf基因的表达。在LPS暴露下，LfU21阻止了免疫反应标志物、GSH水平、drd2和bdnf基因表达以及肠道杯状细胞计数的改变。在LAC和LAC + LPS组中，LfU21分别减轻了α-突触核蛋白的升高、bdnf表达的下降以及“Open Field”和“Rung ladder”测试中的行为缺陷。LfU21在联合帕金森病模型中的多功能活性强调了其治疗潜力，并有助于为未来临床试验确定目标患者队列。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 本研究旨在评估候选药物生物制剂LfU21（副干酪乳杆菌U-21）在联合LPS和乳酸菌素（LPS + LAC）诱导的Wistar大鼠帕金森病模型中对行为、生化、免疫调节和转录参数的影响。
- 核心机制
- LfU21可能通过其抗氧化特性、降低肠道α-突触核蛋白积累以及调节免疫反应来发挥神经保护作用。
- 主要证据
- LfU21降低了α-突触核蛋白水平，在LPS暴露下阻止了GSH耗竭和免疫标志物改变，并改善了LAC和LAC + LPS组的运动行为缺陷。
- 研究意义
- LfU21在联合模型中的多功能活性凸显了其治疗潜力，并有助于为未来临床试验确定目标患者队列。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
LfU21干预
评估LfU21对模型各生物标志物的影响。
在手术后2天开始，每天口服LfU21（1.5×10^10 CFU/3 mL，0.3 mL/天），直至实验结束。
行为学评估
评估神经毒素和LfU21对运动功能和非运动症状的影响。
在术后8周进行Rung Ladder测试和Open Field测试，评估步态质量、运动活性、神经质评分等。
组织学和免疫组织化学分析
评估多巴胺能系统完整性、神经炎症、α-突触核蛋白积累和肠道杯状细胞计数。
对脑、肠组织进行免疫组化（TH, IBA1）和免疫荧光（α-突触核蛋白）染色，并对小肠进行阿尔辛蓝染色。
转录组分析
检测纹状体中多巴胺受体、神经营养因子相关基因的表达变化。
从纹状体提取RNA，逆转录后进行qPCR检测drd2、ngf、bdnf、trkB的表达。
生化标志物检测
评估肝脏氧化应激和炎症状态。
检测肝脏SOD、CAT活性，GSH水平，以及细胞因子IL-6、IL-10、TNF水平。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 立体定位手术 | 乳酸菌素 | ENZO | -- |
| 模型诱导 | 脂多糖 | Sigma-Aldrich | -- |
| 细菌培养 | MRS琼脂 | HiMedia | -- |
| MRS肉汤 | HiMedia | -- | |
| RNA提取 | ExtractRNA试剂 | Eurogen | -- |
| IntactRNA溶液 | Eurogen | -- | |
| 逆转录 | MMLV逆转录酶试剂盒 | Eurogen | -- |
| qPCR | qPCRmix-HS SYBR试剂盒 | Eurogen | -- |
| CFX96系统 | Bio-Rad | -- | |
| 氧化应激检测 | SOD检测试剂盒 | Elabscience | E-BC-K031-S |
| CAT检测试剂盒 | Cloud-Clone Corp. | IS104/A001-1-2 | |
| GSH检测试剂盒 | Elabscience | E-BC-K030-S | |
| ELISA | IL-6 ELISA试剂盒 | Cloud-Clone Corp. | HEA133Ra |
| IL-10 ELISA试剂盒 | Cloud-Clone Corp. | HEA079Ra | |
| TNF ELISA试剂盒 | Cloud-Clone Corp. | HEA056Ra | |
| 组织学 | 抗酪氨酸羟化酶抗体 | Abcam | ab137869 |
| 抗IBA1抗体 | Abcam | ab178847 | |
| 抗总α-突触核蛋白抗体 | Sigma | -- | |
| 抗磷酸化α-突触核蛋白抗体 | Abcam | -- | |
| 行为学分析 | Any-Maze追踪系统 | Stoelting Inc. | -- |
| 组织学 | 冰冻切片机 | Sakura FineTek | -- |
| ImageJ | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型 | 动物种系、性别、年龄、体重：雄性Wistar大鼠，3.5个月龄，体重300-350g 阅读提示：Materials and Methods, Animal Collection and Maintenance |
| 模型诱导 | LAC剂量、注射体积、注射部位、LPS剂量、给药频率和持续时间、给药途径 阅读提示：Materials and Methods, Surgical Operations and Experimental Design |
| LfU21给药 | 菌株剂量、浓度、给药体积、给药频率、开始时间 阅读提示：Materials and Methods, Surgical Operations and Experimental Design |
| 行为学测试 | 测试时间点（术后8周）、测试设备参数、分析指标 阅读提示：Materials and Methods, Analysis of Behavioral Activity |
| 转录组分析 | 每组动物数量（3只）、RNA提取方法、逆转录方法、qPCR条件（退火温度等）、内参基因 阅读提示：Materials and Methods, Transcription Analysis |