提取物制备与成分分析
确定蓝蓟提取物的酚类成分和含量
使用甲醇和水制备提取物,通过LC/MS/MS分析酚类化合物,包括总酚和总黄酮含量测定。
Moltkia coerulea extracts alleviate caspase-3 activity via reducing oxidative stress in LPS-induced neurotoxicity in BV-2 cells.
包括细胞活力、ROS、caspase-3活性测定和成分分析,未涉及动物模型或临床样本。
BV-2小胶质细胞
LPS浓度1 μg/mL,处理24小时 提取物浓度5-20 μg/mL,预处理1、6、12小时 ROS检测使用20 μM DCFH-DA,孵育30分钟 caspase-3活性测定使用试剂盒,基于吸光度405 nm 细胞活力检测使用MTT,浓度0.5 mg/mL,孵育4小时
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
确定蓝蓟提取物的酚类成分和含量
使用甲醇和水制备提取物,通过LC/MS/MS分析酚类化合物,包括总酚和总黄酮含量测定。
确定提取物对BV-2细胞的毒性作用
BV-2细胞用不同浓度提取物处理不同时间,MTT法检测细胞活力。
评估提取物对LPS诱导的BV-2细胞损伤的保护作用
BV-2细胞用提取物预处理1、6、12小时,然后LPS处理24小时,检测细胞活力、ROS水平和caspase-3活性。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | 高糖DMEM培养基 | Capricorn Scientific GmbH | -- |
| 胎牛血清 | Capricorn Scientific GmbH | -- | |
| 胰蛋白酶 | Cegrogen Biotech GmbH | -- | |
| 青霉素-链霉素 | Cegrogen Biotech GmbH | -- | |
| 磷酸盐缓冲液 | Cegrogen Biotech GmbH | -- | |
| 细胞处理 | 二甲基亚砜 | BioShop Canada Inc. | -- |
| 细胞活力测定 | MTT | Sigma-Aldrich | -- |
| 细胞处理 | 脂多糖 | Sigma-Aldrich | -- |
| ROS检测 | ROS检测试剂盒 | Elabscience | E-BC-K138-F |
| caspase-3活性测定 | caspase-3活性检测试剂盒 | Elabscience | E-EL-R0160 |
| 总酚含量测定 | 甲醇 | Sigma-Aldrich | -- |
| 福林酚试剂 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 无水碳酸钠 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 总黄酮含量测定 | 无水乙酸钠 | Sigma-Aldrich | -- |
| 总酚含量测定 | 没食子酸 | Sigma-Aldrich | -- |
| 总黄酮含量测定 | 槲皮素 | Sigma-Aldrich | -- |
| 抗氧化活性测定(未在结果中报告,但提及) | Trolox | Sigma-Aldrich | -- |
| 抗氧化活性测定(未在结果中报告) | DPPH | Tokyo Chemical Industry | -- |
| TPTZ | Sigma-Aldrich | -- | |
| 乙酸 | Merck | -- | |
| 提取制备 | 超声波浴 | MIPRO | MU |
| LC/MS/MS分析 | Dionex Ultimate 3000超高效液相色谱仪 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| TSQ Quantum Access Max质谱仪 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| ODS Hypersil色谱柱 | -- | -- | |
| 细胞活力测定 | 酶标仪(PowerWave XS2) | BioTek Instruments, Inc. | -- |
| ROS检测 | 酶标仪(Modulus) | Turner BioSystems | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养与处理 | BV-2细胞培养条件、LPS浓度和处理时间、提取物浓度和预处理时间 阅读提示:2.7 Cell culture studies, 2.8 Cell treatments, 图1-4图注 |
| 细胞活力测定 | MTT浓度、孵育时间、细胞密度、波长和参考波长 阅读提示:2.9 Cell viability assay |
| ROS测定 | DCFH-DA浓度、孵育时间、激发/发射波长、校准曲线 阅读提示:2.10 Reactive oxygen species assay |
| caspase-3活性测定 | 试剂盒来源、底物Ac-DVD-pN浓度、孵育时间、检测波长 阅读提示:2.11 Caspase-3 activity assay |
| 成分分析 | 提取方法、LC/MS/MS参数、色谱柱、流动相梯度、流速、柱温、进样量 阅读提示:2.3 Preparation of extracts, 2.6 LC/MS/MS analysis, 表1-2 |