食物和胃肠分泌物对大鼠实验模型中肠道完整性的影响

Effects of food and gastrointestinal secretions on intestinal integrity in an experimental rat model.

作者信息Omer Cennet, Akbar Hajiyev, Burcin Şener, Filiz Akbiyik, Cenk Sökmensüer, Osman Abbasoglu
PMID41383250
发布时间2025-12-01
DOI10.3892/etm.2025.13035

实验完整度

包含手术模型、组织学、免疫组化、微生物培养及血浆生化分析等多个实验层级,并进行功能与机制验证。

主要模型

Sprague-Dawley大鼠 空肠手术模型(胆胰转流、空肠旁路) 肠段(对照组S1-S3,BPS1-3,JPS1-3)

重点核对

动物分组:30只雄性SD大鼠随机分为三组(n=10) 手术方式:胆胰转流和空肠旁路的具体手术步骤 肠段类型:不同肠段(S1、S2、S3)对食物和胆胰分泌物的暴露情况 组织学指标:绒毛/隐窝比值、IEL计数 紧密连接蛋白表达:claudin-1、occludin、ZO-3的免疫组化评分

摘要

本研究旨在探讨食物和胆胰分泌物对大鼠模型中肠道形态、紧密连接蛋白表达和微生物组成的单独及联合影响。将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为三组:对照组、胆胰转流组和空肠旁路组。通过手术操作空肠段,选择性地排除胆胰分泌物、食物或两者。同时收集相应的对照段。使用H&E染色分析肠段绒毛高度/隐窝深度比值和上皮内淋巴细胞计数,并使用免疫组化检测紧密连接蛋白表达。此外,获取门静脉血样本,使用ELISA评估血清脂多糖和瓜氨酸水平。此外,对空肠组织进行定量细菌培养。在同时缺乏胆汁和食物的肠段中,绒毛高度/隐窝深度比值显著降低(P=0.007),并且在缺乏食物和胆汁的肠段中,上皮内淋巴细胞计数显著升高(P<0.001)。此外,claudin-1在缺乏食物的肠段(BPS1和JPS2)中表达显著降低(P=0.035),而occludin在存在食物时表达增加(P=0.016)。总之,食物和胆胰分泌物对维持肠道上皮形态和紧密连接完整性至关重要。与缺乏胆胰分泌物相比,食物剥夺对肠道完整性引起更显著的变化。本研究结果强调了腔内营养和消化分泌物在维持肠道屏障功能中的协同作用。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
食物和胆胰分泌物对肠道完整性(形态、紧密连接蛋白、微生物)的单独及联合影响
核心机制
食物和胆胰分泌物通过调节紧密连接蛋白(claudin-1和occludin)表达和上皮内淋巴细胞计数来维持肠道屏障功能。
主要证据
大鼠模型手术制造不同肠段,H&E染色显示JPS2(无食物无胆汁)绒毛/隐窝比值显著降低,IEL计数升高;免疫组化显示claudin-1在食物缺乏段降低,occludin在仅食物段升高。
研究意义
研究结果强调了腔内营养和消化分泌物在维持肠道屏障功能中的协同作用,为临床营养策略提供参考。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

建立动物模型

创建不同肠段以区分食物和胆胰分泌物的暴露

将30只雄性SD大鼠随机分为三组:对照组(开腹+两处空肠吻合)、胆胰转流组(BP)、空肠旁路组(JP)。通过手术制造不同肠段:对照S1-S3、BPS1(仅胆胰分泌物)、BPS2(仅食物)、BPS3(共同通道)、JPS2(无食物无胆汁)等。

2

组织学分析

评估肠道形态变化

H&E染色测量绒毛高度/隐窝深度比值和上皮内淋巴细胞计数。

3

免疫组化检测紧密连接蛋白

检测claudin-1、occludin和ZO-3的表达

使用免疫组化法检测肠段中紧密连接蛋白的表达,并进行半定量评分。

4

微生物分析

评估肠段细菌负荷

从肠段匀浆制备稀释液,在血琼脂和Endo琼脂上培养,计数菌落形成单位。

5

血浆生化分析

测量门静脉血中LPS和瓜氨酸水平

使用ELISA试剂盒测量血浆LPS和瓜氨酸水平。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
头孢唑林----
6-0聚二氧六环酮缝线----
伊红----
正常山羊血清Sigma-AldrichG9023
抗claudin-1抗体Abcamab140349
抗occludin抗体Abcamab168986
抗ZO-3抗体Abcamab191143
Leica HRP偶联检测试剂盒LeicaDS9800
LPS ELISA试剂盒ElabscienceE-EL-0025
瓜氨酸ELISA试剂盒MyBioSourceMBS2600386

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
动物处理
大鼠品系、性别、年龄、体重、饲养条件、随机分组方法、手术方式、麻醉药物及剂量、术后镇痛及抗生素使用
阅读提示:Materials and methods, Animals, Animal groups and surgical design
组织学分析
固定液、固定时间、切片厚度、染色时间、评估标准(绒毛/隐窝比值、IEL计数)
阅读提示:Materials and methods, Histopathology and immunohistochemistry
免疫组化
抗原修复条件、一抗浓度、检测试剂盒、显色时间、评分标准
阅读提示:Materials and methods, Histopathology and immunohistochemistry
微生物分析
组织匀浆比例、稀释系列、培养基类型、培养条件、细菌计数方法
阅读提示:Materials and methods, Microbiological and biochemical analyses
生化分析
血样采集部位、抗凝剂、ELISA试剂盒及货号、测量指标
阅读提示:Materials and methods, Microbiological and biochemical analyses