TBL1XR1通过PPAR途径调节甘油三酯代谢促进冠状动脉疾病

TBL1XR1 Promotes Coronary Artery Disease by Regulating Triglyceride Metabolism via the PPAR Pathway.

作者信息Liping Yang, Liyuan Tang, Wenping Gao, Shanshan Zhu, Jiandi Liu, Yuhui He, Fanbo Meng
PMID41476864
发布时间2025-12-28
DOI10.1155/crp/8877293

实验完整度

包含临床样本检测、细胞功能验证和统计相关性分析,但缺乏动物模型和体内验证。

主要模型

人肝细胞L-02 冠心病患者外周血样本

重点核对

TBL1XR1 mRNA和蛋白在外周血中的表达(RT-PCR和Western blot) TBL1XR1表达与甘油三酯水平及Gensini评分的相关性 siRNA敲低TBL1XR1后PPARα表达变化 siRNA敲低TBL1XR1后细胞内甘油三酯水平变化

摘要

Introduction: Transducin beta-like 1 X-linked receptor 1 (TBL1XR1) is significantly upregulated in the peripheral blood of patients with coronary artery disease (CAD). This study aimed to validate the differential expression of TBL1XR1 in CAD and investigate its role in CAD progression using RNA interference.Methods: The expression of TBL1XR1 at the mRNA and protein levels was detected in patients with CAD and controls using reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting. Additionally, the effects of TBL1XR1 gene silencing in human liver cells through RNA interference on PPARα expression and intracellular triglyceride (TG) levels were determined.Results: TBL1XR1 expression was significantly higher in the peripheral blood of CAD patients compared to controls at both mRNA (1.71 ± 0.96 vs. 1.00 ± 0.34, p < 0.01) and protein levels (0.41 ± 0.19 vs. 0.13 ± 0.07, p = 0.038). Logistic regression analysis revealed that high TBL1XR1 expression is an independent risk factor for CAD. Relative TBL1XR1 expression positively correlated with serum TG levels (rs = 0.56, p < 0.01) and Gensini score (rs = 0.53, p < 0.01), indicating an association with CAD severity. In human liver cells, TBL1XR1 silencing significantly increased peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα) expression at both mRNA (p < 0.05) and protein levels (p < 0.01) while reducing intracellular TG levels (0.24 ± 0.16 vs. 0.51 ± 0.09, p < 0.01).Conclusion: TBL1XR1 is a key factor for risk assessment, diagnosis, and evaluating coronary lesion severity in patients with CAD. Its role in promoting atherosclerosis initiation and development may be associated with regulation of TG metabolism via the PPARα pathway.

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
TBL1XR1在冠心病中的表达及其通过PPAR途径调控甘油三酯代谢的机制。
核心机制
TBL1XR1通过负调控PPARα表达,促进甘油三酯积累,从而促进冠状动脉粥样硬化的发生发展。
主要证据
冠心病患者外周血中TBL1XR1 mRNA和蛋白显著升高;敲低TBL1XR1上调PPARα并降低肝细胞甘油三酯水平;TBL1XR1表达与甘油三酯和Gensini评分正相关。
研究意义
TBL1XR1可作为冠心病风险分层、诊断和冠状动脉病变严重程度评估的潜在生物标志物,并为阐明冠心病发病机制提供新见解。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

临床样本收集与特征分析

比较冠心病患者与对照组的基本临床资料和血脂水平。

纳入96例冠心病患者和98例对照,收集外周血,检测空腹血糖和血脂指标。

2

TBL1XR1表达检测

验证TBL1XR1在冠心病患者外周血中的表达是否异常。

提取外周血总RNA和蛋白,通过RT-PCR和Western blot检测TBL1XR1 mRNA和蛋白表达。

3

临床相关性与风险分析

评估TBL1XR1表达与冠心病风险及严重程度的关系。

进行Logistic回归分析风险因素,计算TBL1XR1与甘油三酯、Gensini评分的相关性,并绘制ROC曲线。

4

细胞模型与siRNA敲低实验

验证TBL1XR1敲低对肝细胞甘油三酯代谢的影响及其机制。

培养人肝细胞L-02,设计三种siRNA干扰TBL1XR1表达,检测敲低效率后,用50% FBS培养基诱导TG合成,测定PPARα表达和TG水平。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
RPMI-1640完全培养基KeyGEN BioTECHKGM31800S
胎牛血清Thermo Fisher Scientific10099-141
青霉素-链霉素溶液SolarbioP1400
Lipofectamine 3000转染试剂Thermo Fisher ScientificL3000015
OPTI-MEM减血清培养基Thermo Fisher Scientific31985-062
总RNA提取试剂盒TiangenDP419
反转录试剂盒TOYOBOFSQ-101
SYBR Premix Ex Taq试剂盒TakaraRR420A
外周血淋巴细胞分离液HaoyangLTS1077
RIPA裂解液BeyotimeP0013B
BCA蛋白定量试剂盒ElabscienceE-BC-K318
小鼠抗β-肌动蛋白抗体TransGenHC201
辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgGServicebioGB23301
兔抗TBL1XR1抗体AbclonalA7834
兔抗PPARα抗体AffinityAF5301
辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgGServicebioGB23303
甘油三酯测定试剂盒Nanjing JianchengA110-1-1
NanoDrop 2000分光光度计Thermo Fisher ScientificND-2000
CFX Connect荧光定量PCR仪Bio-Rad184-1000
Tanon-5200全自动化学发光成像系统Tanon Science & TechnologyTanon-5200
WD-2012B自动酶标仪Liuyi BiotechnologyWD-2012B

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
临床样本检测
CAD患者入组标准依据WHO 1979年标准;对照组经冠状动脉造影或CTA排除冠心病;外周血采集后2小时内提取RNA和蛋白。
阅读提示:见Methods 2.1, 2.3.1
细胞培养与转染
L-02细胞培养条件(37°C, 5% CO2, 89% RPMI-1640, 10% FBS, 1% PS);转染时细胞密度约70%;转染试剂和siRNA用量(5μL Lipo3000, 12.5μL siRNA);转染后48小时提取RNA/蛋白。
阅读提示:见Methods 2.3.2
RT-PCR
RNA质量要求(28S:18S=2:1, OD260/280=1.9-2.1);反转录RNA量1μg;PCR条件(95°C 10min; 40个循环: 95°C 10s, 58°C 30s, 72°C 30s)。
阅读提示:见Methods 2.3.3及表2
Western blot
SDS-PAGE上样量30μg;转膜条件(300mA, 90min);封闭条件(室温1h);一抗浓度和来源(如TBL1XR1 1:1000, PPARα 1:1000)。
阅读提示:见Methods 2.3.4
TG含量测定
细胞分组(空白对照、模型、阴性对照、siRNA-258);50% FBS处理48小时;超声破碎条件(300W, 3-5s, 间隔30s, 重复4次);测定波长562nm。
阅读提示:见Methods 2.3.5
统计分析
正态资料用均数±标准差,t检验或单因素方差分析;非正态资料用秩和检验;分类资料用χ2检验;Logistic回归和Spearman相关分析。
阅读提示:见Methods 2.3.6