大补阴丸和牵正散通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路正向调节氧化应激来缓解帕金森病

背景：帕金森病（PD）是一种进行性恶化的神经退行性疾病。PD的进展涉及多种病理机制，包括黑质纹状体通路中多巴胺（DA）神经元的丢失和氧化损伤加剧。大补阴丸联合牵正散称为补阴牵正方（BYQZF），是中医药治疗PD的处方，但其神经保护作用和机制尚不清楚。目的：本研究旨在探讨BYQZF如何激活Keap1/Nrf2/HO-1通路有效减轻氧化损伤，为其潜在的抗PD作用提供见解。方法：采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）分析BYQZF的化学成分和药代动力学。然后，我们评估了BYQZF治疗的毒性和安全性。在建立MPTP诱导的PD小鼠模型并给予BYQZF治疗后，通过转棒实验、爬杆实验和旷场实验评估PD样行为。通过免疫荧光和蛋白质印迹分析检测黑质纹状体通路中DA神经元的丢失和凋亡。通过ELISA、免疫荧光Co-IP、RT-qPCR和蛋白质印迹分析评估这些脑区的氧化应激水平和Keap1-Nrf2的解离状态。我们构建了Nrf2敲低PD细胞模型。使用实时定量PCR和蛋白质印迹分析测定转录和Nrf2蛋白表达水平。在MPP+和BYQZF暴露后，我们进一步评估了细胞活力、细胞内ATP含量、凋亡细胞比例以及CAT和GSH的表达水平。结果：使用UPLC-MS/MS技术系统鉴定了BYQZF的化学成分。药代动力学评估结果表明，PD的病理状况显著影响BYQZF在体内的药代动力学行为。BYQZF治疗最终通过减轻黑质纹状体通路中多巴胺能神经元的损伤，改善了MPTP诱导的PD小鼠的运动障碍。此外，BYQZF通过降低8-OHdG水平并增加CAT、GSH/GSSG、HO-1、NQO1和GCLM水平来减少氧化应激造成的损伤。进一步，BYQZF治疗促进了Keap1和Nrf2的解离以及Nrf2的核转位。最后，通过Nrf2敲低PD细胞模型的功能实验表明，BYQZF的神经保护作用依赖于Nrf2的完整性，Nrf2缺陷显著削弱了其抗氧化和抗凋亡作用。结论：本研究阐明BYQZF通过Keap1/Nrf2/HO-1信号通路改善PD并减轻氧化应激，这有利于激发靶向PD药物开发的新策略。