实验感染与临床监测
建立ASFV感染模型，观察疾病进展。
对家猪和野猪经口鼻接种ASFV，每日监测临床症状和临床评分，记录直肠温度（仅家猪）。
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实验感染非洲猪瘟病毒的家猪和野猪唾液中分析物的变化
Changes in saliva and serum analytes in domestic pigs and wild boar experimentally infected with African swine fever virus.
实验完整度
高包含体内实验（家猪和野猪）两种动物模型，并通过多种生化检测、qPCR和临床观察进行功能验证。
主要模型
家猪（crossbred） 野猪
重点核对
实验动物：7头杂种家猪和7头野猪，约5月龄 接种物：ASFV "Prenzlau 22" 脾脏悬液，104 HAU50/mL，经口鼻接种 采样时间点：0、2、7天感染后 临床评分系统：标准化评分，累积评分≥15达到人道终点 qPCR检测：Virotype 2.0试剂盒，C1000热循环仪CFX96系统
摘要
非洲猪瘟（ASF）已达到前所未有的全球传播，威胁着各大洲的家猪和野猪。在非洲以外的家猪和野生猪科动物中，该病与病毒性出血热的症状相关，其发病机制迄今尚未完全阐明。为了弥补这些知识空白，研究唾液中可测量的不同病理生理途径的生物标志物，可以提供重要的见解，并有助于更全面地理解ASF的发病机制。在本研究中，对实验性感染ASFV（"Prenzlau 22"）的家猪（DP）和野猪（WB）进行了动物实验。为此，在ASFV感染的三个不同时间点，对DP和WB唾液中的多种生物标志物进行了分析。为了比较，还评估了血清生化、qPCR值和临床参数（即临床评分和直肠体温）。感染DP唾液中的生物标志物分析显示，触珠蛋白、S100A8/A9、S100A12、总蛋白、腺苷脱氨酶和LDH显著升高。在WB中，感染后第7天唾液中α-淀粉酶升高。此外，在DP和WB的血清中观察到应激和炎症生物标志物的变化。总的来说，在本报告中，我们证明了ASFV感染的DP和WB唾液和血清分析物的显著变化，反映了应激、免疫系统和炎症等病理生理机制。在未来的研究中，应探究这些分析物作为疾病生物标志物和评估宿主对感染反应的工具的潜力。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 非洲猪瘟病毒（ASFV）感染家猪和野猪后，唾液和血清中的生物标志物是否发生变化？
- 核心机制
- ASFV感染激活应激、免疫系统和炎症反应，并导致组织损伤。
- 主要证据
- 实验性感染ASFV后，家猪唾液中触珠蛋白、总蛋白、S100A8/A9、S100A12、ADA和LDH显著升高；野猪唾液中α-淀粉酶升高。家猪和野猪血清中触珠蛋白、ITIH4、ADA和LDH升高。
- 研究意义
- 唾液分析物可作为ASF发病机制的非侵入性生物标志物，并有助于评估宿主对感染的反应。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
样本采集与病毒载量检测
采集唾液和血清样本，并检测ASFV基因组载量。
在0、2、7天感染后采集唾液和血清样本，通过qPCR检测病毒载量。
唾液和血清生物标志物测量
检测与应激、炎症、免疫、氧化应激和组织损伤相关的生物标志物。
使用免疫学方法和生化分析仪测量多种生物标志物，包括皮质醇、催产素、α-淀粉酶、触珠蛋白、ITIH4、总蛋白、S100A8/A9、S100A12、ADA、FRAP、LDH和CK。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 样本采集 | 聚丙烯海绵 | La Griega E. Koronis | -- |
| Sarstedt Monovette® | Sarstedt | -- | |
| 生物标志物测量 | AlphaLISA检测 | PerkinElmer, Inc. | -- |
| 抗皮质醇单克隆抗体 | Thermo Scientific | MA1–16,703 | |
| 猪ITIH4 ELISA试剂盒 | ElabSciences | -- | |
| 腺苷脱氨酶检测试剂盒 | Diazyme Laboratories | -- | |
| α-淀粉酶 | Beckman Coulter Inc. | OSR6182 | |
| 触珠蛋白 | Beckman Coulter Inc. | -- | |
| 尿液和脑脊液蛋白 | Spinreact | -- | |
| BÜHLMANN fCal Turbo®检测 | BÜHLMANN Laboratories AG | -- | |
| 乳酸脱氢酶 | Beckman Coulter Inc. | -- | |
| 肌酸激酶 | Beckman Coulter Inc. | -- | |
| Olympus AU400生化分析仪 | Olympus Diagnostica GmbH | -- | |
| 病毒检测 | Virotype 2.0检测 | -- | -- |
| C1000热循环仪配CFX96实时系统 | Biorad | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 实验感染 | 动物数量、年龄、接种物浓度和途径 阅读提示：见Materials and methods - Experimental design |
| 临床监测 | 临床评分标准和直肠温度测量 阅读提示：见Materials and methods - Clinical monitoring |
| 样本采集 | 唾液和血清采集方法及采样时间点 阅读提示：见Materials and methods - Animal sample collection |
| 病毒载量检测 | qPCR试剂盒和仪器设置 阅读提示：见Materials and methods - Detection of ASFV genome |
| 生物标志物测量 | 所测生物标志物及对应检测方法 阅读提示：见Materials and methods - Measurement of biomarkers |