样本收集与处理
获取用于微生物群、SCFA和血清标志物分析的粪便和血液样本。
从16名CRC患者和16名健康对照收集粪便和血液样本,粪便样本分装于无菌管,血液离心分离血清,均储存于-80°C。
Investigation of Intestinal Microbiota and Short-Chain Fatty Acids in Colorectal Cancer and Detection of Biomarkers.
包含患者和对照的粪便菌群测序、血清ELISA及粪便SCFA检测,但样本量小,缺少功能验证和机制验证。
结直肠癌患者粪便样本 健康对照者粪便样本 结直肠癌患者血清样本 健康对照者血清样本
样本类型:粪便和血清 样本量:每组16例 DNA提取试剂盒:Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe Miniprep Kit 测序平台:Oxford Nanopore MinION ELISA试剂盒:E-EL-H5560和E-EL-M3090
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取用于微生物群、SCFA和血清标志物分析的粪便和血液样本。
从16名CRC患者和16名健康对照收集粪便和血液样本,粪便样本分装于无菌管,血液离心分离血清,均储存于-80°C。
分析肠道微生物群的组成和多样性。
使用Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe Miniprep Kit提取粪便DNA,扩增16S rRNA基因V1-V9区域,使用Oxford Nanopore测序平台进行长读长测序。
处理测序数据以获得分类信息和多样性指数。
使用Guppy将fast5转换为fastq,用Trimmomatic清理读段,使用BLAST比对参考数据库获得OTU,并进行α多样性和β多样性分析及LEfSe分析。
评估肠道屏障完整性和内毒素暴露水平。
使用ELISA试剂盒测量血清连蛋白和LBP水平。
定量粪便中短链脂肪酸的水平。
使用GC-MS/MS分析粪便SCFA,包括乙酸、丙酸、丁酸等。
比较两组间的差异并确定统计学显著性。
使用R软件进行统计分析,包括t检验、卡方检验和Mann-Whitney U检验。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| DNA提取 | Quick-DNA™粪便/土壤微生物小提试剂盒 | Zymo Research | -- |
| PCR扩增 | MyGeneTM L系列帕尔贴热循环仪 | LongGene | -- |
| 纳米孔测序 | SQK-NBD114.96试剂盒 | Oxford Nanopore Technologies | -- |
| FLO-MIN114流槽 | Oxford Nanopore Technologies | -- | |
| Mk1C测序仪 | Oxford Nanopore Technologies | -- | |
| ELISA | E-EL-H5560 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-H5560 |
| E-EL-M3090 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-M3090 | |
| 短链脂肪酸分析 | 气相色谱-串联质谱仪(Agilent 8860系列) | Agilent | -- |
| DB-FFAP色谱柱 | Agilent | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本收集 | 样本类型:粪便和血清;样本量:每组16例;储存条件:-80°C 阅读提示:Materials and Methods: 样本收集 |
| DNA提取和测序 | DNA提取试剂盒:Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe Miniprep Kit;测序平台:Oxford Nanopore;靶标区域:16S rRNA V1-V9 阅读提示:Materials and Methods: Microbiota analysis |
| ELISA | ELISA试剂盒:E-EL-H5560和E-EL-M3090;样本:血清 阅读提示:Materials and Methods: Zonulin and LBP measurement |
| SCFA分析 | GC-MS/MS设备;色谱柱:DB-FFAP;样本量:1g粪便 阅读提示:Materials and Methods: SCFA analysis |