受试者招募与样本采集
收集新诊断T2DM患者和健康对照的临床信息及生物样本。
纳入55例新诊断T2DM患者和40名健康对照,采集空腹静脉血和粪便样本,并记录人口学特征和临床指标。
Acylated Ghrelin Mediates the Link Between Akkermansia Abundance and Insulin Resistance in Type 2 Diabetes.
横断面研究,包括临床样本的生化检测、16S rRNA测序、LEfSe差异分析和中介分析,但缺乏功能或机制验证。
新诊断2型糖尿病患者(55例) 健康对照(40名) 粪便样本(16S rRNA基因测序)
AG ELISA检测:ELabscience AG ELISA试剂盒,测定血清酰化饥饿素水平 16S rRNA测序:V3-V4区域,MGISEQ-2000RS平台 分组:T2DM(n=55)vs HC(n=40) 协变量:年龄、性别、BMI 中介分析:5000次bootstrap,95% CI,调整年龄、性别、BMI
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
收集新诊断T2DM患者和健康对照的临床信息及生物样本。
纳入55例新诊断T2DM患者和40名健康对照,采集空腹静脉血和粪便样本,并记录人口学特征和临床指标。
测定血糖相关指标及饥饿素水平。
使用高效液相色谱法测定HbA1c,自动生化分析仪测定FBG,自动免疫分析仪测定CP,ELISA试剂盒测定AG和UAG。
分析T2DM与健康对照的肠道菌群组成差异。
提取粪便DNA,扩增16S rRNA V3-V4区,进行高通量测序;使用USEARCH聚类OTU,计算α和β多样性,并通过LEfSe鉴定差异菌群。
评估饥饿素、差异菌群与葡萄糖代谢指标的关系,并检验AG的中介作用。
使用Spearman相关分析评估差异菌丰度与AG及代谢指标的相关性;以细菌丰度为自变量、代谢指标为因变量、AG为中介变量,进行中介分析,并调整年龄、性别和BMI。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 生化检测 | VARIANT II TURBO 2.0糖化血红蛋白分析仪 | Bio-Rad | -- |
| C16000系列自动分析仪 | Abbott | -- | |
| I2000系列自动分析仪 | Abbott | -- | |
| AG ELISA试剂盒 | ELabscience | -- | |
| UAG ELISA试剂盒 | Yuanjie | -- | |
| 粪便样本DNA提取 | MagPure粪便DNA KF试剂盒B | MAGEN | MD5115-02B |
| 16S rRNA测序 | MGISEQ-2000RS测序平台 | BGI | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 受试者纳入与分组 | T2DM组55例,HC组40名;年龄、性别和BMI匹配;T2DM为新诊断且未使用降糖药物;排除标准包括年龄、慢性消化系统疾病、糖尿病并发症等。 阅读提示:见2.1参与者部分及表1 |
| 生化指标检测 | 检测HbA1c、FBG、CP、AG和UAG的仪器与试剂盒品牌及方法。 阅读提示:见2.3生化检测部分 |
| 肠道菌群测序与分析 | 16S rRNA V3-V4区域测序,OTU聚类阈值97%,LEfSe分析LDA>3,FDR p<0.05。 阅读提示:见2.4和2.5部分 |
| 相关性与中介分析 | Spearman相关分析;中介分析以AG为中介变量,检验间接效应,bootstrap 5000次,CI不包括0为显著,调整年龄、性别、BMI。 阅读提示:见2.6统计分析部分 |