哈姆达尼羊胎儿期舌乳头:大体、扫描电子显微镜、组织化学和免疫组织化学分析

Lingual Papillae in Hamdani Sheep During Foetal Periods: Gross, Scanning Electron Microscopy, Histochemical and Immunohistochemical Analysis.

作者信息Barış Can Güzel, İhsan Işbilir, Senem Esin Yavaş, Fatma Işbilir
PMID40590234
发布时间2025-07
DOI10.1002/vms3.70403

实验完整度

包含大体观察、光镜(HE、Masson Trichrome)、扫描电镜和免疫组化(CK-5、E-cadherin、EphB2、EphB3)多个独立证据层级,且涵盖三个孕期胎儿样本。

主要模型

哈姆达尼羊胎儿舌头(孕早期、中期、晚期)

重点核对

胎儿妊娠分期(孕早期38–48天、孕中期56–73天、孕晚期105–118天) 每个孕期5个胎儿样本 舌组织固定:10%缓冲福尔马林(pH 7.4)24小时 免疫组化一抗稀释度(EphB3 1:600,E-cadherin 1:100,CK-5 1:300,EphB2 1:300) 扫描电镜样本制备:2.5%戊二醛固定,锇酸后固定,梯度酒精脱水,金溅射镀膜

摘要

本研究旨在探讨在三个妊娠期采集的绵羊胎儿舌组织的发育、大体、显微和免疫组织化学特征。研究使用从私人屠宰场宰杀的怀孕母羊采集的胎儿进行。为此,共使用了15个胎儿,分别为孕早期(38–48天)5个、孕中期(56–73天)5个和孕晚期(105–118天)5个。胎儿舌头被仔细解剖并从口腔中取出。首先,使用体视显微镜检查其大体特征。使用扫描电子显微镜进行微观形态学评估,并使用苏木精-伊红和马森三色方法在光学显微镜下检查舌头。通过免疫组织化学分析确定了细胞角蛋白(CK)-5、E-钙粘蛋白、EphB2和EphB3蛋白在舌上皮中的表达和定位。根据光镜和电镜结果,确定舌组织在孕早期开始发育,舌乳头可见为原始原基。尽管在孕中期舌头持续生长,但检测到原始味蕾和乳头结构。在孕晚期,观察到舌乳头变得更加明显。除味蕾外,还检测到乳头中的浆液腺。确定在舌乳头发育过程中,味觉乳头和机械乳头同时形成,且乳头位于舌尖、舌体和舌根,没有时间顺序。此外,在所有三个孕期,覆盖乳头的上皮中检测到CK-5和E-钙粘蛋白等上皮标志物以及EphB2和EphB3受体的表达。除了对形态学文献做出贡献外,我们的结果可能为未来旨在阐明绵羊舌头和其他上皮组织正常发育的研究提供信息。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
本研究旨在探讨哈姆达尼羊胎儿期舌头和舌乳头的发育形态,以及不同产前发育阶段舌上皮中特定蛋白的表达。
核心机制
在舌乳头发育过程中,味觉乳头和机械乳头同时形成,无时间顺序;上皮标志物CK-5、E-cadherin以及EphB2、EphB3受体在三个孕期均有表达,可能参与舌上皮发育。
主要证据
基于15个胎儿(每个孕期5个)的舌头样本,通过大体观察、扫描电镜、组织化学(HE、Masson Trichrome)和免疫组化分析,观察到舌乳头从孕早期原基到孕晚期成熟形态的发育过程,并检测到CK-5、E-cadherin、EphB2和EphB3在上皮中的表达。
研究意义
本研究首次在绵羊中鉴定出CK-5和E-cadherin在胎儿期的表达,为未来研究舌乳头发育机制提供了理论基础,并可能有助于理解正常舌头发育及相关缺陷。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

胎儿采集与舌头解剖

获取不同孕期胎儿舌头样本,用于形态学和分子分析。

从私人屠宰场收集怀孕母羊胎儿,根据冠臀长度计算孕龄,排除双胎,解剖并取出舌头。

2

大体观察

宏观评估舌头形态和乳头发育随孕期的变化。

解剖后的舌头进行大体检查,记录三个孕期的差异;孕早期舌头使用体视显微镜检查。

3

组织学与组织化学分析

观察舌组织发育和乳头结构的显微特征。

舌头样本固定、包埋、切片,进行HE和Masson三色染色,光镜观察并拍照。

4

免疫组织化学分析

检测舌上皮中CK-5、E-cadherin、EphB2和EphB3蛋白的表达与定位。

石蜡切片进行抗原修复、封闭内源性过氧化物酶、一抗孵育、二抗孵育、ABC复合物和DAB显色,复染后光镜观察。

5

扫描电子显微镜分析

观察舌乳头的三维超微结构形态。

舌头样本经固定、脱水、干燥、镀金后,在扫描电镜下观察并拍照。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
奥林巴斯SZ61体视显微镜Olympus--
马森三色染色试剂盒----
奥林巴斯BX 50显微镜Olympus--
奥林巴斯DP71数码相机Olympus--
抗EphB3抗体Elabscience--
抗E-钙粘蛋白抗体----
抗CK-5抗体----
抗EphB2抗体----
生物素化驴抗兔二抗Jackson ImmunoResearch--
生物素化驴抗小鼠二抗Jackson ImmunoResearch--
ABC复合物----
DAB色原----
磷酸盐缓冲液----
乙醇----
金溅射镀膜仪----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
胎儿采集
胎儿数量(每个孕期5个)、孕龄(孕早期40-50天,孕中期56-73天,孕晚期105-118天)、单胎妊娠
阅读提示:Materials and Methods: Animals
组织处理与组织化学
固定液(10%缓冲福尔马林,pH 7.4)、固定时间(24小时)、切片厚度(5微米)、染色方法(HE、Masson Trichrome)
阅读提示:Materials and Methods: Tissue Processing and Histochemical Analyses
免疫组织化学
抗原修复(pH 6.0柠檬酸钠缓冲液,98°C,30分钟)、过氧化氢浓度(3%,10分钟)、封闭血清(10%马血清)、一抗类型和稀释度(EphB3 1:600,E-cadherin 1:100,CK-5 1:300,EphB2 1:300)、二抗稀释度(1:300,2小时)、显色(DAB)
阅读提示:Materials and Methods: Immunohistochemical Analyses
扫描电子显微镜
固定(2.5%戊二醛,pH 7.2,1天)、洗涤(0.1 M磷酸盐缓冲液,pH 7.4)、后固定(锇酸,2小时)、脱水(梯度酒精)、干燥(60°C,2天)、镀金
阅读提示:Materials and Methods: Scanning Electron Microscopic (SEM) Examination