胎儿采集与舌头解剖
获取不同孕期胎儿舌头样本,用于形态学和分子分析。
从私人屠宰场收集怀孕母羊胎儿,根据冠臀长度计算孕龄,排除双胎,解剖并取出舌头。
Lingual Papillae in Hamdani Sheep During Foetal Periods: Gross, Scanning Electron Microscopy, Histochemical and Immunohistochemical Analysis.
包含大体观察、光镜(HE、Masson Trichrome)、扫描电镜和免疫组化(CK-5、E-cadherin、EphB2、EphB3)多个独立证据层级,且涵盖三个孕期胎儿样本。
哈姆达尼羊胎儿舌头(孕早期、中期、晚期)
胎儿妊娠分期(孕早期38–48天、孕中期56–73天、孕晚期105–118天) 每个孕期5个胎儿样本 舌组织固定:10%缓冲福尔马林(pH 7.4)24小时 免疫组化一抗稀释度(EphB3 1:600,E-cadherin 1:100,CK-5 1:300,EphB2 1:300) 扫描电镜样本制备:2.5%戊二醛固定,锇酸后固定,梯度酒精脱水,金溅射镀膜
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取不同孕期胎儿舌头样本,用于形态学和分子分析。
从私人屠宰场收集怀孕母羊胎儿,根据冠臀长度计算孕龄,排除双胎,解剖并取出舌头。
宏观评估舌头形态和乳头发育随孕期的变化。
解剖后的舌头进行大体检查,记录三个孕期的差异;孕早期舌头使用体视显微镜检查。
观察舌组织发育和乳头结构的显微特征。
舌头样本固定、包埋、切片,进行HE和Masson三色染色,光镜观察并拍照。
检测舌上皮中CK-5、E-cadherin、EphB2和EphB3蛋白的表达与定位。
石蜡切片进行抗原修复、封闭内源性过氧化物酶、一抗孵育、二抗孵育、ABC复合物和DAB显色,复染后光镜观察。
观察舌乳头的三维超微结构形态。
舌头样本经固定、脱水、干燥、镀金后,在扫描电镜下观察并拍照。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 大体观察 | 奥林巴斯SZ61体视显微镜 | Olympus | -- |
| 组织学分析 | 马森三色染色试剂盒 | -- | -- |
| 奥林巴斯BX 50显微镜 | Olympus | -- | |
| 奥林巴斯DP71数码相机 | Olympus | -- | |
| 免疫组织化学分析 | 抗EphB3抗体 | Elabscience | -- |
| 抗E-钙粘蛋白抗体 | -- | -- | |
| 抗CK-5抗体 | -- | -- | |
| 抗EphB2抗体 | -- | -- | |
| 生物素化驴抗兔二抗 | Jackson ImmunoResearch | -- | |
| 生物素化驴抗小鼠二抗 | Jackson ImmunoResearch | -- | |
| ABC复合物 | -- | -- | |
| DAB色原 | -- | -- | |
| 扫描电子显微镜分析 | 磷酸盐缓冲液 | -- | -- |
| 乙醇 | -- | -- | |
| 金溅射镀膜仪 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 胎儿采集 | 胎儿数量(每个孕期5个)、孕龄(孕早期40-50天,孕中期56-73天,孕晚期105-118天)、单胎妊娠 阅读提示:Materials and Methods: Animals |
| 组织处理与组织化学 | 固定液(10%缓冲福尔马林,pH 7.4)、固定时间(24小时)、切片厚度(5微米)、染色方法(HE、Masson Trichrome) 阅读提示:Materials and Methods: Tissue Processing and Histochemical Analyses |
| 免疫组织化学 | 抗原修复(pH 6.0柠檬酸钠缓冲液,98°C,30分钟)、过氧化氢浓度(3%,10分钟)、封闭血清(10%马血清)、一抗类型和稀释度(EphB3 1:600,E-cadherin 1:100,CK-5 1:300,EphB2 1:300)、二抗稀释度(1:300,2小时)、显色(DAB) 阅读提示:Materials and Methods: Immunohistochemical Analyses |
| 扫描电子显微镜 | 固定(2.5%戊二醛,pH 7.2,1天)、洗涤(0.1 M磷酸盐缓冲液,pH 7.4)、后固定(锇酸,2小时)、脱水(梯度酒精)、干燥(60°C,2天)、镀金 阅读提示:Materials and Methods: Scanning Electron Microscopic (SEM) Examination |