建立下牙槽神经横断小鼠模型
模拟临床下牙槽神经损伤,评估唇部感觉恢复的自然过程及血清素相关分子的变化。
对C57BL/6J小鼠进行下牙槽神经横断手术,对照组仅暴露神经不切断。术后每4天使用Von Frey纤维丝评估唇部感觉,持续8周。
Serotonin promotes lip sensory recovery after inferior alveolar nerve transection via histone serotonylation.
包含体内小鼠模型和体外原代神经元两个独立证据层级,并通过外源性血清素和GK921抑制剂进行功能验证及机制验证(组蛋白血清素化),覆盖分子、细胞和整体水平。
C57BL/6J小鼠下牙槽神经横断模型 三叉神经节原代神经元
C57BL/6J小鼠,8周龄雄性,约20g,购自成都达硕实验动物有限公司 下牙槽神经横断模型建立方法 血清素(100μM)或GK921(50μM)经眶下孔注射至三叉神经节 Von Frey纤维丝定量感觉测试,每4天测量一次,持续8周,每组5只小鼠 体外培养原代三叉神经节神经元,添加血清素(100μM)或GK921(50μM)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟临床下牙槽神经损伤,评估唇部感觉恢复的自然过程及血清素相关分子的变化。
对C57BL/6J小鼠进行下牙槽神经横断手术,对照组仅暴露神经不切断。术后每4天使用Von Frey纤维丝评估唇部感觉,持续8周。
探究神经损伤后血清素系统及组蛋白修饰的变化。
通过ELISA检测三叉神经节中血清素水平,qRT-PCR检测血清素产生相关基因,免疫荧光和Western blot检测H3Q5ser和H3K4me3水平及TGM2蛋白表达。
确定血清素是否能直接促进三叉神经元轴突生长及机制。
培养原代三叉神经节神经元,给予100μM血清素处理,测量轴突长度,并通过Western blot检测H3Q5ser/H3K4me3比例,qRT-PCR检测轴突再生相关基因,ELISA检测NGF水平。
验证血清素能否在体内加速唇部感觉恢复。
建立下牙槽神经横断模型,通过眶下孔注射100μM血清素,术后每4天进行Von Frey测试,并检测三叉神经节中H3Q5ser、轴突再生相关分子和NGF水平。
通过抑制转谷氨酰胺酶2减少组蛋白血清素化,反向验证血清素的作用机制。
原代神经元同时给予血清素和GK921,检测轴突长度、H3Q5ser水平及轴突再生相关分子表达。
确认抑制组蛋白血清素化会延缓唇部感觉恢复,进一步验证因果关系。
下牙槽神经横断模型小鼠注射50μM GK921,评估感觉恢复及分子变化。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | 盐酸血清素 | MedChemExpress | HY-B1473 |
| GK921 | MedChemExpress | HY-12337 | |
| 细胞培养 | 胰蛋白酶 | Gibco | -- |
| DMEM/F12培养基 | Gibco | -- | |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| N2添加剂 | Invitrogen | -- | |
| B27添加剂 | Invitrogen | -- | |
| RNA提取 | TRIzol试剂 | Thermo Fisher Scientific | 15596026 |
| 逆转录 | TaqMan MicroRNA逆转录试剂盒 | Takara | RR047A |
| 实时定量PCR | SYBR Green荧光染料 | Takara | RR820A |
| 7900HT快速实时荧光定量PCR系统 | Applied Biosystems | 4329001 | |
| Western blot | RIPA裂解缓冲液 | BioSharp | -- |
| 蛋白酶抑制剂混合物 | MedChemExpress | -- | |
| Epizyme凝胶试剂盒 | Epizyme | -- | |
| 聚偏二氟乙烯膜 | Sigma-Aldrich | -- | |
| H3Q5ser抗体 | PTM Bio | PTM-1420 | |
| H3K4me3抗体 | PTM Bio | PTM-5019 | |
| H3抗体 | PTM Bio | PTM-6613 | |
| TGM2抗体 | Cell Signaling Technology | 3557 | |
| ATF3抗体 | Cell Signaling Technology | 18665 | |
| GAPDH抗体 | Servicebio | GB15002 | |
| ELISA | 血清素ELISA试剂盒 | Sangon Biotech | D751013 |
| NGF ELISA试剂盒 | Elabscience | M0815 | |
| 免疫荧光 | Tuj1抗体 | Cell Signaling Technology | 5568 |
| 山羊血清 | BioSharp | -- | |
| 柠檬酸缓冲液 | Beyotime | -- | |
| 含DAPI的抗荧光淬灭封片剂 | Biosharp | -- | |
| 二抗 | ZSGB-BIO | -- | |
| 动物模型 | 异氟烷 | -- | -- |
| 感觉评估 | Von Frey纤维丝 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 小鼠品系(C57BL/6J)、性别(雄性)、年龄(8周龄)、体重(约20g)、供应商(成都达硕实验动物有限公司)、麻醉方法(异氟烷)、手术方法(经颏孔切开并横断神经) 阅读提示:Materials and methods中的Animal models部分 |
| 药物给予 | 血清素浓度(100μM)、GK921浓度(50μM)、给药途径(经眶下孔注射至三叉神经节)、注射器规格(29G) 阅读提示:Materials and methods中的Animal models部分 |
| 感觉功能评估 | Von Frey纤维丝测试方法、测量频率(每4天一次)、持续时间(8周)、每组数量(5只) 阅读提示:Materials and methods中的Sensory function assessment部分及Figure legends |
| 体外神经元培养 | 神经元来源(出生后小鼠三叉神经节)、消化条件(0.125% trypsinase, 37°C, 20分钟)、培养基组成(DMEM/F12, N2 1:100, B27 1:50, 50μg/ml ampicillin)、培养时间(2天)、血清素和GK921浓度 阅读提示:Materials and methods中的Cell culture部分 |
| 分子检测 | Western blot上样量(30μg/孔)、电泳条件(80V 30分钟,120V约1.5小时)、一抗稀释比例(免疫荧光1:100)、ELISA样本制备方法 阅读提示:Materials and methods中的Western blot、Immunofluorescence和ELISA部分 |