基于半抗原免疫亲和垂钓技术鉴定脑出血小鼠脑组织中三七皂苷的蛋白靶点AIF1

背景：脑出血（ICH）是一种致死性卒中，具有高死亡率或致残率。尽管近期研究表明三七在脑出血治疗中具有疗效，但尚不清楚其发挥这些优势可能靶向哪些蛋白质。方法：首先，通过用人参皂苷Rh1-mcKLH结合物免疫大鼠，制备了抗三七皂苷的多克隆抗体。其次，使用基于LC-MS的半抗原免疫亲和垂钓（HIAF）技术鉴定了ICH小鼠脑组织中三七皂苷的潜在靶蛋白。第三，将疾病靶点数据库与这些蛋白质求交集。第四，采用生物层干涉法（BLI）、分子对接和定点突变验证同种异体移植炎症因子1（AIF1）作为三七皂苷的蛋白靶点。最后，进行生物信息学分析以检查AIF1的生物学特征。结果：通过基于LC-MS的HIAF，将鉴定的蛋白靶点与疾病靶点数据库求交集，发现了一个潜在的三七皂苷蛋白靶点AIF1。BLI分析显示，化合物K（CK）与AIF1具有最高的直接相互作用，平均位移值为0.1091 nm。随后，定点突变、分子对接和BLI动力学分析表明，CK特异性结合AIF1，亲和力值为4.33 ± 0.17E-6 M，且显著依赖于残基L122和E125。生物信息学分析显示，AIF1及其直接相互作用蛋白与小胶质细胞活化相关。结论：我们的研究提出了一种筛选天然小分子蛋白靶点的新技术，并成功鉴定AIF1为三七皂苷的蛋白靶点，为进一步研究靶向AIF1治疗ICH提供了化学和生物学基础。