小鼠疲劳模型建立与MOL给药
评估MOL对小鼠疲劳模型的影响
将KM小鼠随机分为对照组、模型组和MOL低、中、高剂量组,每日给予相应剂量的MOL或水,连续14天,通过负重游泳实验诱导疲劳。
Preliminary investigation of anti-fatigue effects and potential mechanisms of meiju oral liquid in mouse and zebrafish models.
研究包含小鼠负重游泳实验、斑马鱼模型行为与存活实验、Western blot蛋白验证、RT-qPCR基因表达分析以及UPLC-Q-TOF/MS成分鉴定等多个独立证据层级,完成功能与机制验证。
KM小鼠运动疲劳模型 AB品系幼年斑马鱼疲劳模型
MOL灌胃剂量:1.67、3.34、6.68 mL/kg,每日一次,连续14天 负重游泳实验:负重7%体重,水温30±2°C,终点为头部沉水超过6秒 斑马鱼亚硫酸钠浓度:8 mg/mL,处理1小时 斑马鱼MOL浓度:5、10、20 μL/mL,处理24小时 Western blot检测肝脏NOX4、TNF-α、p-PI3K、p-AKT蛋白
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估MOL对小鼠疲劳模型的影响
将KM小鼠随机分为对照组、模型组和MOL低、中、高剂量组,每日给予相应剂量的MOL或水,连续14天,通过负重游泳实验诱导疲劳。
评估MOL对疲劳相关代谢产物和炎症因子的影响
游泳实验结束后采集血液,离心分离血清,用ELISA试剂盒检测IL-1β、IL-6、TNF-α和NO水平,同时测定肝糖原、肌糖原、血乳酸和尿素氮。
明确MOL对PI3K/AKT通路和氧化应激相关蛋白的影响
取小鼠肝脏组织,提取蛋白,通过Western blot检测NOX4、TNF-α、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和GAPDH的表达。
评估MOL对斑马鱼疲劳模型的保护作用
5 dpf幼年斑马鱼用MOL或ROL处理24小时,然后用8 mg/mL亚硫酸钠诱导疲劳,观察存活率和运动行为。
明确MOL对斑马鱼炎症和PI3K/AKT通路基因表达的影响
收集斑马鱼样本,提取RNA,通过RT-qPCR检测TNF-α、TNF-β、IL-1β、IL-6、PI3K和AKT1的mRNA表达。
鉴定MOL的化学成分和潜在活性成分
采用UPLC-Q-TOF/MS分析MOL的化学成分,并检测小鼠灌胃后血清中的迁移成分。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 血清生化检测 | 尿素氮含量检测试剂盒 | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | BC1535 |
| 乳酸含量检测试剂盒 | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | BC2235 | |
| NO含量检测试剂盒 | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. | BC1475 | |
| 组织糖原检测 | 肝糖原检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute | 20200513 |
| 肌糖原检测试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute | 20200316 | |
| 炎症因子检测 | 小鼠IL-1β ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-EL-M0037 |
| 小鼠IL-6 ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-EL-M0044 | |
| 小鼠TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-EL-M3063 | |
| Western blot | NOX4抗体 | Abcam | ab112414 |
| TNF-α抗体 | Abcam | ab6671 | |
| PI3K抗体 | Abcam | ab302958 | |
| 磷酸化PI3K抗体 | Abcam | ab278545 | |
| AKT抗体 | CST | 9272 | |
| 磷酸化AKT抗体 | CST | 4058 | |
| GAPDH抗体 | ZSGB-Bio | TA-08 | |
| 斑马鱼培养 | 氯化钠 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 7647-14-5 |
| 氯化钙 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 10043-52-4 | |
| 硫酸镁 | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. | 7487-88-9 | |
| 斑马鱼疲劳诱导 | 亚硫酸钠 | Sigma-Aldrich | 239321 |
| MOL制备 | ZTC1+1-III澄清剂 | -- | -- |
| 蛋白提取 | RIPA裂解液 | Beyotime Biotechnology | P0013B |
| 蛋白定量 | BCA蛋白定量试剂盒 | Beyotime Biotechnology | P0012 |
| RNA提取 | SPARKeasy组织/细胞RNA快速提取试剂盒 | SparkJade | AC0201 |
| RT-qPCR | NovoStart SYBR qPCR SuperMix Plus | Novoprotein | E096 |
| HiScript III RT SuperMix for qPCR | Vazyme | R323 | |
| 动物麻醉 | 异氟烷 | -- | -- |
| 阳性对照 | 红景天口服液 | Hangzhou Huawei Pharmaceutical Co., Ltd. | B20050055 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 小鼠分组与给药 | 动物品系、性别、体重范围、样本量、给药剂量和周期 阅读提示:Materials and methods: Evaluation of anti-fatigue effects ... 中的Experimental grouping and model construction,Table 2 |
| 负重游泳实验 | 负重重量(7%体重)、水温(30±2°C)、水深(约25cm)、终点定义(头部沉水超过6秒) 阅读提示:Materials and methods: Evaluation of anti-fatigue effects ... 中的Experimental grouping and model construction |
| 血清生化与炎症指标检测 | 采血时间(游泳后30分钟)、血清分离条件(2500rpm 10min 4°C)、检测试剂盒品牌及货号 阅读提示:Materials and methods: Measurement of plasma inflammatory factors by ELISA |
| Western blot | 组织裂解条件、抗体稀释度、内参蛋白、检测蛋白 阅读提示:Materials and methods: Western blot analysis |
| 斑马鱼给药与疲劳诱导 | 斑马鱼品系、日龄(5 dpf)、培养条件、MOL/ROL浓度、亚硫酸钠浓度及处理时间 阅读提示:Materials and methods: Zebrafish embryo acquisition, Determination of LD50, Effect of MOL on survival rate |
| RT-qPCR | 引物序列、内参基因(β-actin)、PCR反应条件 阅读提示:Materials and methods: Effect of MOL on mRNA expression levels ... 和Table 3 |