长蛇灸对肾阳虚大鼠11β-HSD1还原酶及HPA轴的调节作用

Regulation of 11β-HSD1 reductase and the HPA axis by long-snake moxibustion in kidney-yang deficiency rats.

作者信息Hui Huang, Jingjiao Zeng, Limei Tang, Lele Geng, Xijing Yu, Chenying Deng, Hang Liu, Ping Huang, Ensi Hong, Xiuwu Hu
PMID39397979
期刊Heliyon
发布时间2024-09-30
DOI10.1016/j.heliyon.2024.e38486

实验完整度

包含大鼠体内模型、免疫组化、Western blot、ELISA等多层级验证,并使用抑制剂进行机制验证,实验完整度高。

主要模型

SD大鼠肾阳虚模型 氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠模型

重点核对

氢化可的松肌肉注射剂量:25 mg/kg 氢化可的松注射持续天数:21天 长蛇灸治疗方案:每两天一次,共7次,每次5壮艾灸 11β-HSD1抑制剂BVT2733给药剂量:10 mL/kg,灌胃,持续15天 血清ACTH、CORT、CRH水平检测方法:ELISA

摘要

背景:长蛇灸可以改善肾阳虚证(KYDS)患者的下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能。11β-HSD1通过还原酶活性促进CORT生成,从而控制HPA轴。然而,长蛇灸与11β-HSD1之间的相互作用和机制仍不清楚。本研究探讨了长蛇灸对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响,并探讨了11β-HSD1在此过程中的潜在意义。方法:将大鼠随机分为空白组和实验组。采用氢化可的松肌肉注射建立肾阳虚证模型。将大鼠随机分为四组:模型组、假干预组、长蛇灸组和长蛇灸加11β-HSD1抑制剂组。物理指标包括体重、趾温、肛温和自发活动。检测血清中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)的水平。免疫组织化学检测肝脏中11β-HSD1蛋白表达。蛋白质印迹(WB)检测肝脏中11β-HSD1、H6PDH和NADPH/NADP+蛋白的水平。结果:实验大鼠的体重、趾温、肛温、自发活动时间和频率均下降,血清ACTH、CORT和CRH水平也下降。肝脏中11β-HSD1、H6PDH和NADPH/NADP+的蛋白表达显著降低。长蛇灸改善了大鼠的HPA轴功能,提高了11β-HSD1、H6PDH和NADPH/NADP+的表达。在长蛇灸中加入11β-HSD1抑制剂减弱了其对HPA轴的作用。结论:长蛇灸通过增加11β-HSD1表达和还原酶活性改善肾阳虚证大鼠的症状,从而调节HPA轴。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
长蛇灸能否通过调节11β-HSD1的表达和还原酶活性来改善肾阳虚大鼠的HPA轴功能?
核心机制
长蛇灸通过上调肝脏11β-HSD1表达并增强其还原酶活性(依赖H6PDH和NADPH),促进皮质酮生成,从而调节HPA轴,改善肾阳虚症状。
主要证据
在氢化可的松诱导的肾阳虚大鼠模型中,长蛇灸治疗显著增加肝脏11β-HSD1、H6PDH和NADPH/NADP+的表达,并提高血清ACTH、CORT和CRH水平;加入11β-HSD1抑制剂后,这些效应减弱。
研究意义
该研究为长蛇灸治疗肾阳虚提供了分子机制依据,并提示11β-HSD1可能是潜在治疗靶点,为临床应用提供了新思路。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

建立肾阳虚大鼠模型

评估氢化可的松肌肉注射是否成功诱导肾阳虚模型,并导致HPA轴功能低下。

大鼠随机分为空白组和实验组,实验组每日肌肉注射氢化可的松溶液(25 mg/kg)连续21天,空白组注射生理盐水。建模后通过体重、趾温、肛温、自发活动及血清ACTH、CORT、CRH水平评估模型。

2

长蛇灸干预及抑制剂处理

观察长蛇灸对肾阳虚大鼠的影响,并验证11β-HSD1是否介导其作用。

将模型大鼠分为模型组、假干预组、长蛇灸组和长蛇灸+11β-HSD1抑制剂组。长蛇灸组在固定的大鼠背部督脉上铺姜泥和艾条并点燃,每次5壮,每两天一次,共7次。假干预组仅固定不点燃艾条。抑制剂组在长蛇灸同时每日灌胃BVT2733溶液(10 mL/kg),持续15天。

3

物理体征与HPA轴激素检测

评估长蛇灸对各组大鼠物理体征和HPA轴相关激素水平的影响。

治疗前后测量各组大鼠体重、趾温、肛温及自发活动;治疗后采集血清,用ELISA检测ACTH、CORT和CRH水平。

4

肝脏11β-HSD1表达检测

验证长蛇灸对肝脏11β-HSD1表达的影响及其与HPA轴调节的关系。

取大鼠肝脏组织,通过免疫组化和Western blot检测11β-HSD1蛋白表达水平。

5

11β-HSD1还原酶活性相关蛋白检测

探究长蛇灸是否通过影响H6PDH和NADPH来调节11β-HSD1还原酶活性。

用Western blot检测各组大鼠肝脏中H6PDH和NADPH/NADP+的蛋白表达量。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

动物模型建立
行为学检测
激素水平检测

产品清单

实验环节名称品牌货号
氢化可的松Solarbio830U051
艾条Bozhou Traditional Chinese Medicine Factory--
BVT2733----
11β-HSD1抗体AffinitDF3972
H6PDH抗体Abcamab170895
NADPH/NADP+抗体Abcamab133303
辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG(H+L)Zhongshan Golden Bridge BiotechnologyZB-2301
DAB显色试剂盒CWBIOCW0125
苏木素BosterAR1180-1
ECL增强化学发光液ThermoFisherRJ239676
BCA蛋白定量试剂盒ElabscienceE-BC-K318-M
β-肌动蛋白抗体TransGen BiotechHC201
显微镜OlympusBX43
自动酶标仪ShanpuSuPerMax
蛋白质垂直电泳仪LiuYiDYY-6C
超灵敏化学发光成像系统Bio-RadChemi
自动化学发光图像分析系统Tanon Science & TechnologyTanon-5200

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
动物模型建立
氢化可的松剂量、注射途径、注射频率、持续时间
阅读提示:动物建模部分(2.3节)
长蛇灸干预
干预频率、每次灸数、总体次数、一天中的时间、艾灸材料放置位置
阅读提示:长蛇灸和药物干预部分(2.4节)
抑制剂处理
抑制剂名称、剂量、给药方式、频率、持续时间
阅读提示:长蛇灸和药物干预部分(2.4节)
样本量与分组
每组动物数、分组情况
阅读提示:长蛇灸和药物干预部分(2.4节)
HPA轴激素检测
检测指标、样本类型、检测方法
阅读提示:ELISA检测部分(2.6节)
蛋白表达检测
抗体浓度、蛋白提取、电泳、转膜及封闭条件
阅读提示:免疫组化(2.7节)和Western blot(2.8节)部分