病例选择与分组
收集并选择符合标准的cMCT病例,按Kiupel分级分为低级别和高级别。
回顾性检索2017-2021年NTUVH的犬原发性皮肤肥大细胞瘤病例,排除非皮肤和复发性MCT,随机选取20例低级别和20例高级别cMCT。
Prognostic significance of YKL-40 expression in canine cutaneous mast cell tumors.
包含免疫组化、Western blot、生存分析等,但主要为回顾性观察,缺乏功能验证和机制验证。
犬皮肤肥大细胞瘤组织样本(40例)
组织样本来源:国立台湾大学兽医医院2017年至2021年手术切除的原发性皮肤肥大细胞瘤 组织学分級:根据Kiupel分级系统分为低级别和高级别各20例 YKL-40表达半定量:采用免疫反应评分(IRS),由两位病理学家盲法评分 生存分析:总生存期定义为从诊断到任何原因死亡的时间,采用Kaplan-Meier法和log-rank检验
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
收集并选择符合标准的cMCT病例,按Kiupel分级分为低级别和高级别。
回顾性检索2017-2021年NTUVH的犬原发性皮肤肥大细胞瘤病例,排除非皮肤和复发性MCT,随机选取20例低级别和20例高级别cMCT。
验证抗人YKL-40抗体对犬YKL-40的交叉反应性。
通过Western blot检测犬重组YKL-40蛋白,使用兔抗人YKL-40抗体和抗His标签抗体。
检测cMCT组织中YKL-40的表达水平并半定量评分。
对福尔马林固定石蜡包埋的组织切片进行IHC染色,使用兔抗人YKL-40抗体,通过IRS评分。
收集临床信息并评估病理特征,包括有丝分裂计数、血管密度等。
从病历和病理报告收集患者信息,包括品种、年龄、性别、肿瘤直径、有丝分裂计数、淋巴结转移等。
评估YKL-40表达水平与总生存期的关联。
通过病历或电话随访获得生存状态,采用Kaplan-Meier法和log-rank检验比较不同YKL-40表达组的生存差异。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| Western blot | 兔多克隆抗人YKL-40抗体 | ABclonal Inc | Cat. A3166 |
| 小鼠抗His标签抗体 | Abcam | -- | |
| 山羊抗兔IgG(H+L) | Elabscience | Cat. E-AB-1003 | |
| Immobilon Western化学发光HRP底物 | Merck | -- | |
| MultiGel 21凝胶成像系统 | TOP BIO Co. | -- | |
| 免疫组织化学 | Trilogy | Millipore Sigma | Cat. 920P-06 |
| Novolink聚合物检测系统 | Leica Biosystems | Cat. RE7260-CE | |
| 兔抗YKL-40抗体 | ABclonal Inc | Cat. A3166 | |
| 小鼠抗人CD31抗体 | Agilent | Cat. M0823 | |
| DAB底物缓冲液 | Leica Biosystems | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 病例选择 | 病例纳入标准(原发性cMCT、2017-2021年、排除非皮肤和复发性);样本量(40例,低/高级别各20) 阅读提示:Methods: Case selection |
| 免疫组化染色 | 一抗浓度(1:100)、抗原修复条件(EDTA, 90°C, 30分钟)、抗体孵育时间(1小时室温) 阅读提示:Methods: Immunohistochemical (IHC) staining |
| YKL-40表达评分 | IRS评分标准(阳性细胞百分比×染色强度)、分级定义(mild 2-3, moderate 4-8, strong 9-12) 阅读提示:Methods: YKL-40 expression analysis |
| 生存分析 | 总生存期定义、删失标准、中位随访时间(383天) 阅读提示:Methods: Clinical outcomes and Statistical analysis |