YKL-40表达在犬皮肤肥大细胞瘤中的预后意义

Prognostic significance of YKL-40 expression in canine cutaneous mast cell tumors.

作者信息Chien-Chun Kuo, Wei-Hsiang Huang, Su-Ya Yang, Yen-Chen Chang, Hui-Wen Chang, Chian-Ren Jeng, Jih-Jong Lee, Albert Taiching Liao
PMID39614259
发布时间2024-11-29
DOI10.1186/s12917-024-04385-1

实验完整度

包含免疫组化、Western blot、生存分析等,但主要为回顾性观察,缺乏功能验证和机制验证。

主要模型

犬皮肤肥大细胞瘤组织样本(40例)

重点核对

组织样本来源:国立台湾大学兽医医院2017年至2021年手术切除的原发性皮肤肥大细胞瘤 组织学分級:根据Kiupel分级系统分为低级别和高级别各20例 YKL-40表达半定量:采用免疫反应评分(IRS),由两位病理学家盲法评分 生存分析:总生存期定义为从诊断到任何原因死亡的时间,采用Kaplan-Meier法和log-rank检验

摘要

背景:YKL-40是一种分泌性糖蛋白,参与人类癌症中的肿瘤细胞增殖、转移和血管生成。其过表达与许多人类癌症的不良预后相关。在兽医学中,我们先前的研究观察到犬皮肤肥大细胞瘤(cMCTs)血清中YKL-40水平升高。然而,YKL-40在犬cMCT组织中的表达模式及其与临床和病理特征的关系尚不清楚。本研究旨在回顾性研究犬cMCT组织中YKL-40的表达水平及其与临床特征、病理特征和临床结局的相关性。收集自40只犬的四十个福尔马林固定石蜡包埋的cMCT组织,根据Kiupel分级系统被诊断为低级别(n = 20)或高级别(n = 20)MCT。采用免疫组织化学染色和免疫反应评分(IRS)研究cMCT组织中YKL-40的表达水平。结果:YKL-40在所有cMCT中均有不同程度表达,低级别cMCT中的表达显著强于高级别cMCT。表达水平还与肿瘤直径、组织学分级、有丝分裂计数、血管密度和cMCT的生存期相关。cMCT犬的总生存期在轻度(n = 15,MST 219天)、中度(n = 19,MST未达到)和高度(n = 6,MST未达到)YKL-40表达组之间差异显著(p < 0.01)。在低级别cMCT中,轻度YKL-40表达(MST 319天)和中度至高度YKL-40表达(MST未达到)之间的总生存期显著不同(p < 0.01)。在高级别cMCT中,总生存期与YKL-40表达无相关性(p = 0.6589)。结论:本研究发现,低级别犬皮肤肥大细胞瘤中YKL-40的表达水平显著强于高级别,并与多种临床和病理特征相关。较强的YKL-40表达水平与较长的生存期相关,尤其是在低级别cMCT中。因此,YKL-40可作为cMCT的预后标志物。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
犬皮肤肥大细胞瘤组织中YKL-40表达水平与临床病理特征和预后的关联如何?
核心机制
文中未明确说明。
主要证据
通过免疫组化检测40例cMCT组织,低级别cMCT表达更强,并与较小肿瘤直径、较低有丝分裂计数、较低血管密度及较好生存相关。
研究意义
YKL-40表达水平可作为犬cMCT的预后标志物,尤其在低级别cMCT中。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

病例选择与分组

收集并选择符合标准的cMCT病例,按Kiupel分级分为低级别和高级别。

回顾性检索2017-2021年NTUVH的犬原发性皮肤肥大细胞瘤病例,排除非皮肤和复发性MCT,随机选取20例低级别和20例高级别cMCT。

2

抗体特异性验证

验证抗人YKL-40抗体对犬YKL-40的交叉反应性。

通过Western blot检测犬重组YKL-40蛋白,使用兔抗人YKL-40抗体和抗His标签抗体。

3

免疫组化检测YKL-40表达

检测cMCT组织中YKL-40的表达水平并半定量评分。

对福尔马林固定石蜡包埋的组织切片进行IHC染色,使用兔抗人YKL-40抗体,通过IRS评分。

4

临床与病理特征评估

收集临床信息并评估病理特征,包括有丝分裂计数、血管密度等。

从病历和病理报告收集患者信息,包括品种、年龄、性别、肿瘤直径、有丝分裂计数、淋巴结转移等。

5

生存分析

评估YKL-40表达水平与总生存期的关联。

通过病历或电话随访获得生存状态,采用Kaplan-Meier法和log-rank检验比较不同YKL-40表达组的生存差异。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
兔多克隆抗人YKL-40抗体ABclonal IncCat. A3166
小鼠抗His标签抗体Abcam--
山羊抗兔IgG(H+L)ElabscienceCat. E-AB-1003
Immobilon Western化学发光HRP底物Merck--
MultiGel 21凝胶成像系统TOP BIO Co.--
TrilogyMillipore SigmaCat. 920P-06
Novolink聚合物检测系统Leica BiosystemsCat. RE7260-CE
兔抗YKL-40抗体ABclonal IncCat. A3166
小鼠抗人CD31抗体AgilentCat. M0823
DAB底物缓冲液Leica Biosystems--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
病例选择
病例纳入标准(原发性cMCT、2017-2021年、排除非皮肤和复发性);样本量(40例,低/高级别各20)
阅读提示:Methods: Case selection
免疫组化染色
一抗浓度(1:100)、抗原修复条件(EDTA, 90°C, 30分钟)、抗体孵育时间(1小时室温)
阅读提示:Methods: Immunohistochemical (IHC) staining
YKL-40表达评分
IRS评分标准(阳性细胞百分比×染色强度)、分级定义(mild 2-3, moderate 4-8, strong 9-12)
阅读提示:Methods: YKL-40 expression analysis
生存分析
总生存期定义、删失标准、中位随访时间(383天)
阅读提示:Methods: Clinical outcomes and Statistical analysis