制备DPD水凝胶
制备用于体内植入的脱细胞猪真皮来源的水凝胶。
猪真皮脱细胞处理,冻干,研磨,胃蛋白酶消化,中和,形成水凝胶。
Decellularized porcine dermal hydrogel enhances implant-based wound healing in the setting of irradiation.
研究包含体内动物模型(健康和照射小鼠)、组织学和免疫组化分析、流式细胞术及多维聚类分析等多个独立证据层级,并进行功能验证(纤维化、脂肪生成)和机制验证(巨噬细胞表型)。
小鼠皮下植入模型(C57BL/6) 照射小鼠模型(35 Gy) 脱细胞猪真皮水凝胶 脱细胞真皮基质(ADM)
C57BL/6小鼠,雌性,40只(0 Gy)和40只(35 Gy) 放射剂量:单次35 Gy,使用SARRP225照射器 植入时间:放射后12周 ADM样本:DermACELL,5 mm打孔活检 DPD水凝胶注射量:0.5 mL
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
制备用于体内植入的脱细胞猪真皮来源的水凝胶。
猪真皮脱细胞处理,冻干,研磨,胃蛋白酶消化,中和,形成水凝胶。
模拟放疗对皮肤的影响,建立延迟重建模型。
对小鼠背部皮肤给予单次35 Gy照射,12周后植入材料。
评估DPD水凝胶对ADM整合的影响。
在皮下口袋植入ADM,并在右侧注射DPD水凝胶。
评估纤维化、细胞浸润和脂肪生成。
固定、包埋、切片,进行H&E染色和vimentin、αSMA免疫组化,量化包膜厚度、vimentin面积和脂肪细胞密度。
评估巨噬细胞反应和表型。
收获植入物及周围组织,消化,染色,进行流式细胞术分析。
识别DPD水凝胶对巨噬细胞亚群的影响。
对流式数据使用Phenograph和FlowSOM聚类,比较健康小鼠1周和照射小鼠6周的亚群变化。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| DPD水凝胶制备 | 胰蛋白酶 | -- | -- |
| Triton X-100 | -- | -- | |
| 胃蛋白酶 | -- | -- | |
| 微型切割磨机 | Thermo Fisher Scientific | model #1171H10 | |
| 动物实验 | Plurogel® | Medline Industries | -- |
| 植入物 | DermACELL | LifeNet Health | -- |
| 动物实验 | Ethiqa XR | -- | -- |
| 组织学 | 抗波形蛋白抗体 | Abcam | ab45939 |
| 抗α平滑肌肌动蛋白抗体 | Abcam | ab32575 | |
| 流式细胞术 | RPMI 1640培养基 | Thermo Fisher | A1049101 |
| 胶原酶D | -- | -- | |
| 脱氧核糖核酸酶 | -- | -- | |
| AQUA LIVE/DEAD固定死细胞染色试剂盒 | Invitrogen | -- | |
| TruStain FcX | Biolegend | -- | |
| 抗CX3CR1抗体 | Biolegend | 149031 | |
| 抗CD192抗体 | Biolegend | 150630 | |
| 抗CD184抗体 | Thermo Fisher | 63-9991-80 | |
| 抗F4/80抗体 | Biolegend | 123129 | |
| 抗CD9抗体 | Miltenyi Biotec | 130-123-064 | |
| 抗CD38抗体 | Biolegend | 102717 | |
| 抗CD86抗体 | Elabscience | E-AB-F0994UI | |
| 抗CD163抗体 | Thermo Fisher | 11-1631-82 | |
| 抗CD301b抗体 | Biolegend | 146805 | |
| IC固定缓冲液 | Invitrogen | 50-112-9037 | |
| 透化缓冲液 | Invitrogen | 50-112-9037 | |
| 抗精氨酸酶-1抗体 | Thermo Fisher | 46-3697-80 | |
| Cytek Aurora流式细胞仪 | Cytek Biosciences | -- | |
| 组织学 | Axioscan 7扫描仪 | Zeiss | -- |
| Leica DM6显微镜 | Leica Microsystems | -- | |
| 数据处理 | ImageJ | -- | 2.14 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| DPD水凝胶制备 | 脱细胞步骤的详细时间、试剂浓度(如胰蛋白酶、Triton X-100、过氧乙酸)、消化浓度(15 mg/mL)、胃蛋白酶浓度(1.25 mg/mL)、中和pH(8.8) 阅读提示:见Methods 2.1 脱细胞猪真皮水凝胶的制备 |
| 小鼠放射处理 | 小鼠品系(C57BL/6)、性别(雌性)、年龄/体重(20.9 ± 2.0 g)、放射剂量(35 Gy)、照射器参数(SARRP225)、放射后植入等待时间(12周) 阅读提示:见Methods 2.2 小鼠皮肤放射处理 |
| ADM植入和DPD水凝胶注射 | ADM型号(DermACELL)、尺寸(5 mm直径)、DPD水凝胶注射量(0.5 mL)、麻醉(2%异氟醚)、缝合方式(4-0 Vicryl)、镇痛(Ethiqa XR 3.25 mg/kg) 阅读提示:见Methods 2.3 ADM和DPD水凝胶植入 |
| 组织学和免疫组化 | 固定液(10%缓冲福尔马林)、切片厚度(5微米)、抗vimentin抗体浓度(1:200)、抗αSMA浓度(1:400)、图像分析软件(ImageJ 2.14) 阅读提示:见Methods 2.4 组织学和免疫组化 |
| 流式细胞术 | 消化酶浓度(胶原酶D 2 mg/mL, DNase 1 mg/mL)、细胞计数(每样本1.5百万)、抗体克隆号及稀释度(见方法)、流式细胞仪(Cytek Aurora) 阅读提示:见Methods 2.5 流式细胞术 |