NLR家族成员X1突变（p.Arg707Cys）抑制肝细胞中乙型肝炎病毒感染并促进视黄酸诱导基因1与线粒体抗病毒信号蛋白的相互作用

NLR家族成员X1（NLRX1）是NOD样受体（NLR）家族的重要成员，在免疫系统调节中发挥独特作用。乙型肝炎病毒（HBV）感染患者比健康个体更可能携带NLRX1突变p.Arg707Cys。已有报道表明，NLRX1可增加表达牛磺胆酸钠共转运多肽（NTCP）的HepG2细胞中HBV的感染率。然而，NLRX1突变（p.Arg707Cys）在肝炎中的作用尚不清楚。我们使用LV003慢病毒构建了稳定过表达NTCP的Huh7细胞。首先，构建了野生型（WT）和突变型（MT）NLRX1过表达质粒。MT质粒含有WT过表达质粒第707位点的点突变。然后，将WT或MT NLRX1过表达质粒转染Huh7-NTCP细胞，并使用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质印迹分析后续NLRX1表达。使用RT-qPCR测定HBV RNA水平。通过免疫组织化学确认HBsAg和HBcAg水平。使用酶联免疫吸附测定试剂盒测定干扰素α（IFN-α）、白细胞介素6（IL-6）和I型干扰素β（IFN-β）水平。使用蛋白质印迹检测p-p65、p-干扰素调节因子（IRF）3和p-IRF7的表达水平。通过免疫共沉淀确认NLRX1与视黄酸诱导基因（RIG）-1/线粒体抗病毒信号（MAVS）蛋白的相互作用。通过双荧光素酶报告基因实验分析NLRX1与IFN-α、IL-6或IFN-β的相互作用。转染WT NLRX1或MT NLRX1表达质粒的感染细胞中HBV RNA、HBsAg和HBcAg水平高于未转染对照组；并且这些水平在转染MT NLRX1的细胞中低于转染WT NLRX1的细胞。转染WT NLRX1或MT NLRX1的细胞中IFN-α、IFN-β、IL-6、p-p65、p-IRF3和p-IRF7的水平低于对照细胞。转染MT NLRX1的细胞中IFN-β、p-p65、p-IRF3和p-IRF7的水平高于转染WT NLRX1的细胞。此外，NLRX1竞争性抑制RIG1与MAVS的结合，但MT NLRX1中的突变降低了这种抑制作用。另外，NLRX1降低了IFN-α、IFN-β和IL-6的启动子活性。我们的发现表明，NLRX1是抑制肝细胞抗HBV能力的调节因子，而NLRX1中的p.Arg707Cys突变抑制HBV感染并激活IFN/核因子κB通路。