共占位N-和O-糖肽的定量与位点特异性分析

蛋白质糖基化是一种复杂的翻译后修饰，通常分为N-连接和O-连接。根据所研究的糖基化类型和可用仪器，通过多种碎裂方法完成糖肽的位点特异性分析。例如，碰撞解离方法常用于N-糖蛋白组学分析，假设每个胰蛋白酶肽存在一个N-sequon。或者，基于电子的方法更适用于O-糖位点定位。然而，同时存在N-和O-糖基化的肽可能表明N-糖蛋白组学需要基于电子的碎裂方法，而这并不常进行。因此，我们量化了粘蛋白和其他糖蛋白中N-和O-糖肽的出现频率。在粘蛋白中检测到更高的共占位频率，而在非粘蛋白糖蛋白中仅发生可忽略的出现。这通过重组和/或纯化蛋白以及更复杂样品的分析得到证明。在发生共占位的情况下，O-糖位点通常定位于N-sequon内的Ser/Thr。此外，我们发现与占据的Asn邻近的O-聚糖主要是未加工的core 1结构，而距离较远的则更为延伸。总的来说，我们证明了基于电子的方法对于粘蛋白的稳健位点特异性分析是必需的，其中共占位更为普遍。相反，碰撞方法通常足以分析其他类型的糖蛋白。