建立小鼠心力衰竭模型
复制心肌梗死后心力衰竭的病理状态
对雄性C57BL/6J小鼠进行左前降支冠状动脉(LAD)结扎手术,建立心肌梗死后心力衰竭模型。假手术组除不结扎LAD外,其余操作相同。
Ginseng Radix et Rhizoma enhanced the effect of metoprolol in chronic heart failure by inhibiting autophagy in male C57BL/6J mice.
包含动物模型(LAD结扎)功能验证(超声心动图)、组织病理(HE/Masson染色)、生化指标(CK等)及机制验证(Western blot检测自噬和PI3K/Akt/mTOR通路)。
雄性C57BL/6J小鼠左前降支结扎(LAD)诱导的慢性心力衰竭模型 心肌组织
LAD结扎手术的可行性(心尖变白) 给药剂量:美托洛尔6.25 mg/kg/天,GS 1.3或2.6 g/kg/天(根据体表面积换算) 给药周期:28天 超声心动图参数:EF%、FS%、LVID,d、LVID,s、IVS,d、IVS,s 自噬相关蛋白:LC3II/I、p62、Beclin1、Atg5,以及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
复制心肌梗死后心力衰竭的病理状态
对雄性C57BL/6J小鼠进行左前降支冠状动脉(LAD)结扎手术,建立心肌梗死后心力衰竭模型。假手术组除不结扎LAD外,其余操作相同。
检测药物治疗对心功能的影响
使用小动物超声成像系统(Vevo 2100)进行M型超声心动图,测量EF%、FS%、LVID,d、LVID,s、IVS,d、IVS,s等参数。
评估心肌损伤和纤维化程度
取心脏固定、包埋、切片,进行HE染色和Masson三色染色,观察心肌细胞排列、间质宽度和纤维化情况。
量化心肌损伤程度
收集血清,使用全自动生化分析仪测定CK、CK-MB、LDH水平;使用ELISA试剂盒测定cTnT水平。
观察自噬体的形成和自噬相关蛋白的表达
采用透射电子显微镜观察心肌细胞自噬体和线粒体形态;采用Western blot检测LC3、p62、Beclin1和Atg5蛋白表达。
探究自噬抑制的潜在信号通路机制
Western blot检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白水平,并计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 药物处理 | 酒石酸美托洛尔片 | MedChemExpress | H32025391 |
| 药物制备 | 人参提取物 | Beijing Tongrentang Pharmaceutical Co., Ltd | -- |
| UPLC分析 | 人参皂苷Re | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd | -- |
| 人参皂苷Rg1 | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd | -- | |
| 人参皂苷Rf1 | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd | -- | |
| 人参皂苷Rb1 | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd | -- | |
| 组织病理 | Masson三色染色 | beyotime | C0189S |
| ELISA | 小鼠心肌肌钙蛋白(cTnT)ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-M1801 |
| 生化指标检测 | 血清生化指标LDH、CK、CK-MB ELISA试剂盒 | Shenzhen Mindray Biomedical Electronic Co., Ltd | BS-300 |
| Western blot | 抗LC3抗体 | Abcam | ab192890 |
| 抗Beclin1抗体 | Abcam | ab207612 | |
| 抗Atg5抗体 | Abcam | ab108327 | |
| 抗PI3K抗体 | Abcam | ab191606 | |
| 抗Akt抗体 | Abcam | ab179463 | |
| 抗p-Akt抗体 | Abcam | ab192623 | |
| 抗mTOR抗体 | Abcam | ab134903 | |
| 抗p-PI3K抗体 | CST | 17366 | |
| 抗p-mTOR抗体 | CST | 5536 | |
| 抗p62抗体 | CST | 5114 | |
| 羊抗兔IgG | Beijing Zhongshan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd | -- | |
| UPLC分析 | ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱 | Waters | -- |
| 动物实验 | C57BL/6J小鼠 | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd | SCXK |
| 超声心动图 | Vevo 2100超高分辨率小动物超声成像系统 | VisualSonics | -- |
| Western blot | BCA蛋白定量试剂盒 | Thermo | -- |
| 化学发光仪 | Bio-Rad Laboratories Inc. | -- | |
| 组织病理 | 显微镜 | Zeiss | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 心力衰竭模型建立 | 小鼠品系、性别、年龄、体重、LAD结扎方法、手术操作细节、术后恢复条件 阅读提示:Materials and methods: Animals, Left anterior descending coronary artery (LAD) ligation |
| 药物给药 | 给药剂量(Met 6.25 mg/kg/天,GS 1.3或2.6 g/kg/天)、给药途径(灌胃)、给药频率、给药周期(28天) 阅读提示:Materials and methods: Animals (分组), Results: Fig 2 |
| 心脏功能评估 | 超声心动图参数(EF%、FS%、LVID,d/s、IVS,d/s)、测量条件(麻醉、探头频率) 阅读提示:Materials and methods: Echocardiography, Results: Fig 3 |
| 血清生化指标检测 | 采血时间(第28天)、血清分离条件(3500rpm,15min)、检测试剂盒(Mindray生化分析仪,Elabscience ELISA) 阅读提示:Materials and methods: Measurement of biochemical parameters |
| 自噬相关蛋白检测 | 组织裂解、蛋白提取、SDS-PAGE、转膜、抗体孵育条件、化学发光信号检测 阅读提示:Materials and methods: Western blot analysis |