TRIM家族表达和预后分析
评估TRIM家族成员在胃癌中的表达差异和预后相关性。
整合TCGA-STAD和GSE84437转录组数据,分析TRIMs的表达、差异表达和生存分析。
An investigation of the molecular characterization of the tripartite motif (TRIM) family and primary validation of TRIM31 in gastric cancer.
包含生物信息学分析、体外细胞实验和组织芯片免疫组化验证,但缺乏动物实验和深入的机制研究。
胃癌细胞系AGS 胃上皮细胞系GES-1 胃癌组织微阵列芯片
TRIM31敲低效率(TRIM31-sh3) 细胞增殖能力(MTT和EdU实验) 细胞迁移能力(划痕实验) 氧化应激水平(ROS检测) 线粒体膜电位(JC-1染色)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估TRIM家族成员在胃癌中的表达差异和预后相关性。
整合TCGA-STAD和GSE84437转录组数据,分析TRIMs的表达、差异表达和生存分析。
基于TRIMs表达对胃癌样本进行分子分型并构建预后风险模型。
使用共识聚类将样本分为不同基因簇,通过LASSO和多因素Cox回归筛选hub基因并计算风险评分。
分析TRIM31在胃癌中的表达、预后、通路富集及药物敏感性。
基于TCGA数据比较TRIM31在癌与正常组织中的表达,进行K-M生存分析、GSEA富集分析和药物IC50预测。
验证TRIM31对胃癌细胞增殖、迁移、氧化应激和线粒体功能的影响。
在AGS细胞中敲低TRIM31,进行MTT、EdU、划痕、ROS、JC-1和Western blot实验。
在临床样本中验证TRIM31的表达及其与预后的关系。
对97例胃癌和83例癌旁组织芯片进行TRIM31免疫组化染色,分析其表达差异及与生存的关系。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | RPMI 1640培养基 | -- | -- |
| 胎牛血清 | -- | -- | |
| 青霉素/链霉素 | -- | -- | |
| 慢病毒感染 | 慢病毒(GV112) | Jikai Gene | -- |
| 细胞活力检测 | MTT | Aladdin | M158055 |
| 二甲基亚砜 | -- | -- | |
| 全功能微孔板检测仪 | BioTek | -- | |
| EdU实验 | BeyoClick EdU-488细胞增殖检测试剂盒 | Beyotime | C0071S |
| Hoechst 33342 | -- | -- | |
| 倒置荧光显微镜 | Nikon | -- | |
| 迁移和集落形成实验 | 结晶紫 | Aladdin | C110703 |
| ROS检测 | H2DCFDA | Sigma-Aldrich | D6883 |
| 线粒体膜电位检测 | 线粒体膜电位检测试剂盒 | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-CK-A301 |
| Western blot | Western/IP裂解液 | Beyotime | P0013 |
| PVDF膜 | -- | -- | |
| HRP山羊抗兔IgG(H+L) | Abclonal | AS014 | |
| 抗细胞周期蛋白D1抗体 | Abclonal | A19038 | |
| 抗CDK2抗体 | Abclonal | A0094 | |
| 抗GAPDH抗体 | Cell Signaling Technology | #5174 | |
| 电化学发光检测试剂盒 | -- | -- | |
| 免疫组织化学 | 单克隆兔抗人TRIM31抗体 | Proteintech | -- |
| 组织微阵列芯片 | Shanghai Qutdo Biotech Company | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养和慢病毒感染 | 细胞系来源、培养基成分、慢病毒载体和靶序列、MOI、感染时间、嘌呤霉素筛选浓度和时间 阅读提示:Methods: Cell culture and reagents; Establishment of the stable transfected cell line |
| 细胞增殖和活力检测 | 细胞接种密度、MTT浓度、孵育时间、检测波长、EdU孵育时间 阅读提示:Methods: Cell viability determination; EdU assay |
| 迁移和集落形成实验 | 划痕实验细胞密度、划痕后培养时间;集落形成实验细胞数、培养时间、结晶紫浓度 阅读提示:Methods: Migration and colony formation assay |
| ROS和线粒体膜电位检测 | H2DCFDA浓度、孵育时间;JC-1染色步骤 阅读提示:Methods: ROS assay and measurement of mitochondrial membrane potential |
| Western blot | 裂解液、离心条件、抗体稀释度、封闭时间 阅读提示:Methods: Western blot |
| 免疫组织化学 | 组织芯片样本数量、抗体稀释度、IHC评分方法 阅读提示:Methods: Tissue microarray chips and immunohistochemistry (IHC) staining |