建立缺血性卒中小鼠模型并评估神经功能
模拟临床缺血性卒中,并验证模型是否产生神经功能障碍。
对C57BL/6小鼠实施dMCAO手术,通过激光散斑成像检测脑血流,并采用Garcia评分、网格行走实验和粘性去除实验评估神经功能。
Decreased levels of phosphorylated synuclein in plasma are correlated with poststroke cognitive impairment.
包含动物模型(dMCAO、慢性缺氧)及临床患者样本,并进行了行为学、免疫荧光、ELISA及临床相关分析等功能和机制验证。
dMCAO小鼠模型 慢性缺氧小鼠模型 缺血性卒中患者 健康对照
小鼠模型:C57BL/6成年雄性,2-3月龄,23-25g 缺氧处理:13%浓度,0、1、3、7、14天暴露 dMCAO模型:左侧大脑中动脉远端电凝,大脑中动脉及颈总动脉闭塞 血清p-α-syn检测:ELISA法,标准品由本实验室制备 统计分析:两组比较用非配对t检验或多组比较用单因素方差分析,相关性用Pearson相关
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
模拟临床缺血性卒中,并验证模型是否产生神经功能障碍。
对C57BL/6小鼠实施dMCAO手术,通过激光散斑成像检测脑血流,并采用Garcia评分、网格行走实验和粘性去除实验评估神经功能。
观察缺血性卒中后p-α-syn在脑内是否聚集并导致神经元损伤。
对脑切片进行MAP2和p-α-syn免疫荧光染色,通过共聚焦显微镜观察并定量。
验证慢性缺氧是否导致p-α-syn聚集和神经元损伤,并影响认知和运动功能。
将小鼠置于13%氧气的缺氧舱中,在0、1、3、7、14天通过转棒实验和新物体识别实验评估运动与认知功能,并通过Nissl染色观察神经元损伤,免疫荧光检测p-α-syn。
比较患者与健康对照血清p-α-syn水平,并评估其与临床特征的相关性。
通过ELISA检测血清p-α-syn,分析其与病程、认知评分(MMSE)及生化指标的关系。
探究血清p-α-syn水平是否与HDL水平相关,并进一步关联认知障碍。
对患者血清生化指标与p-α-syn进行Pearson相关性分析,并将患者按HDL水平分组比较p-α-syn水平及认知障碍发生率。
评估缺血后不同时间点血清p-α-syn变化及其与认知行为的关系。
在不同时间点(0、1、3、5、7、10、14天)收集小鼠血清,ELISA检测p-α-syn,并同时进行Y迷宫、新物体识别和开场实验评估认知和焦虑状态。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | 异氟烷 | -- | -- |
| 免疫荧光染色 | 抗MAP2抗体 | Abcam | ab32454 |
| 抗磷酸化α-突触核蛋白抗体 | FUJIFILM Wako Shibayagi | 015-25191 | |
| Alexa Fluor® 488标记亲和纯化山羊抗羊驼IgG | Jackson ImmunoResearch Labs | 128-545-230 | |
| Alexa Fluor® 594标记亲和纯化山羊抗羊驼IgG | Jackson ImmunoResearch Labs | 128-585-230 | |
| Hoechst 33342 | Beyotime | C1022 | |
| Nissl染色 | 二甲苯 | Sigma | 108298 |
| 无水乙醇 | Merck | 818760 | |
| 尼氏染色液 | Beyotime | C0117 | |
| DPX封片剂 | Merck | 06522 | |
| ELISA | 抗磷酸化α-突触核蛋白抗体 | Abcam | ab51253 |
| 碱性磷酸酶标记的小鼠IgG | Sigma | E2636 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 小鼠模型建立 | dMCAO手术细节:左侧颈总动脉结扎,大脑中动脉远端电凝;小鼠品系、性别、年龄和体重 阅读提示:Methods - Animals, The dMCAO model |
| 缺氧处理 | 缺氧浓度、持续时间、时间点(0天、1天、3天、7天、14天) 阅读提示:Methods - Hypoxic treatment |
| 行为学测试 | Garcia评分、网格行走、粘性去除、转棒、新物体识别、Y迷宫、开场实验的具体参数 阅读提示:Methods - Animal behavioral tests |
| 免疫荧光与组织学 | 一抗、二抗的稀释比例和品牌,切片厚度,图像采集设备 阅读提示:Methods - Immunofluorescence staining |
| 血清p-α-syn检测 | ELISA步骤、抗体稀释比例、标准品来源、波长、孵育时间 阅读提示:Methods - Enzyme-linked immunosorbent assay |
| 临床样本收集与分组 | 患者纳入与排除标准、样本量、分组(正常HDL vs 低HDL)、认知评估标准 阅读提示:Methods - Human participants, Results - Serum phosphorylated α-synuclein levels are significantly decreased... |