ERE成分鉴定
鉴定吴茱萸水提物中的主要代谢产物，为其药理作用提供物质基础。
采用UPLC-MS分析ERE色谱峰，鉴定出脱氢吴茱萸碱、吴茱萸内酯、吴茱萸醇、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸卡品、二氢吴茱萸卡品等7个主要成分，并计算相对含量。
关于丁香通
公司信息
个人用户
企业机构
无忧采购 轻松科研
- 移动端
吴茱萸对高尿酸血症和痛风小鼠的抗炎及降尿酸作用
Anti-inflammatory and uric acid lowering effects of Euodiae fructus on hyperuricemia and gout mice.
实验完整度
高包含体外BMDM炎症小体活化实验、体内HFD/PO诱导HUA及MSU诱导痛风模型、肾功能及尿酸转运蛋白检测、肾组织代谢组学等多层级验证，并进行了功能与机制验证。
主要模型
小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM） HFD/PO诱导的HUA及MSU诱导的痛风性关节炎小鼠模型
重点核对
体外BMDM实验中LPS priming 4小时、ERE含药血清处理1小时、不同NLRP3激动剂刺激 体内实验小鼠分组：正常对照组、模型组、ER低剂量组（0.375 g/kg）、ER高剂量组（0.75 g/kg） PO剂量250 mg/kg灌胃，HFD喂养，MSU 2 mg/0.1 mL/只注射入踝关节腔 ER给药时间：第28天至第37天，每日一次；PO及HFD从第0天至第37天 检测指标：血清UA、CRE、BUN、IL-1β、TNF-α，肾组织URAT1、GLUT9、OAT1、ABCG2及NLRP3通路蛋白
摘要
代谢性疾病高尿酸血症（HUA）是由血清尿酸（UA）过多引起的，可导致慢性肾脏病和痛风的风险增加。作为一种广泛使用的中药，吴茱萸（ER）具有显著的抗炎和镇痛作用，然而其对HUA和痛风的治疗作用尚未被研究。为了探讨其潜在作用和机制，研究了ER对小鼠骨髓巨噬细胞中促炎细胞因子和NLRP3炎症小体活化的影响。此外，通过给高脂饮食（HFD）喂养的小鼠联合给予氧嗪酸钾（PO）和单钠尿酸盐晶体37天，建立了HUA和痛风性关节炎的小鼠模型。在注射PO后1小时，口服给予ER水提物，持续10天。我们的研究表明，ER是小鼠巨噬细胞中有效的NLRP3抑制剂。最重要的是，ER（0.75 g/kg）治疗显著降低了踝关节厚度比、血清UA、肌酐和血尿素氮水平（p < 0.05）。此外，ER（0.75 g/kg）显著逆转了肾脏尿酸转运蛋白1（URAT1）和葡萄糖转运蛋白9（GLUT9）的升高以及有机阴离子转运蛋白1（OAT1）和ATP结合盒亚家族G成员2（ABCG2）水平的降低（p < 0.05）。此外，ER（0.75 g/kg）显著改善了血清炎症细胞因子IL-1β和TNF-α的产生（p < 0.01），并改善了肾脏中NLRP3炎症小体信号通路的活化。综上所述，这些数据表明ER作为一种强效且特异的NLRP3抑制剂，具有多种抗HUA、抗痛风和抗炎作用。我们的研究旨在为含有ER的经典中药复方在治疗HUA相关疾病中的传统应用提供实验支持，并可能为ER的临床应用增加新的维度。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- 吴茱萸（ER）是否对高尿酸血症和痛风具有治疗作用，其作用机制是否通过抑制NLRP3炎症小体激活？
- 核心机制
- ER通过阻断ASC寡聚化特异性地抑制NLRP3炎症小体激活，降低caspase-1活化和IL-1β分泌，从而改善炎症；并通过调节肾尿酸转运蛋白（下调URAT1、GLUT9，上调OAT1、ABCG2）促进尿酸排泄。
- 主要证据
- 体外BMDM实验中ER含药血清抑制多种激动剂诱导的caspase-1活化和IL-1β释放；体内HFD/PO诱导HUA及MSU诱导痛风小鼠模型中，ER（0.75 g/kg）降低血清UA、CRE、BUN及炎症因子，并抑制肾组织中NLRP3和caspase-1 p20表达。
- 研究意义
- 研究为含有ER的经典中药复方治疗HUA相关疾病提供了实验支持，并可能为ER的临床应用增加新方向。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
体外验证ER对NLRP3炎症小体的抑制作用
验证ER是否抑制NLRP3炎症小体激活，并检测其特异性。
LPS预刺激BMDMs，给予ERE含药血清处理，再用NLRP3激动剂（尼日利亚霉素、ATP、SiO2、MSU等）刺激，检测caspase-1活性、IL-1β和caspase-1切割、ASC寡聚化；同时检测对AIM2和NLRC4炎症小体的影响。
体内建立HUA和痛风小鼠模型并给予ER治疗
评估ER对HUA和痛风小鼠的治疗效果。
C57BL/6J小鼠分为正常对照组、模型组、ER低剂量组（0.375 g/kg）和高剂量组（0.75 g/kg），模型组和ER组给予PO和HFD 37天，第36天踝关节腔注射MSU，ER组从第28天起每天灌胃ERE，检测关节肿胀、血清生化指标、血常规及肾组织蛋白表达。
肾组织代谢组学分析
探索ER对HUA小鼠肾组织代谢谱的影响，发现差异代谢物。
采用UPLC-MS/MS对肾组织进行非靶向代谢组学分析，通过PCA、PLS-DA、OPLS-DA筛选差异代谢物，并鉴定潜在生物标志物。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
验证样本或模型特征
评估体内效果
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | 巨噬细胞集落刺激因子 | MedChemExpress | HY-P7085 |
| 细胞实验 | Caspase-Glo 1炎症小体检测试剂盒 | Promega | G9951 |
| ASC寡聚化 | 双琥珀酰亚胺辛二酸酯 | MedChemExpress | HY-W019543 |
| 动物实验 | 氧嗪酸钾 | -- | -- |
| 单钠尿酸盐晶体 | -- | -- | |
| 高脂饮食 | Jiangsu Xietong Pharmaceutical Bio-engineering Co., Ltd. | XTHF60 | |
| ELISA | 小鼠IL-1β ELISA试剂盒 | Elabscience | E-MSEL-M0003 |
| 小鼠TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-M3063 | |
| Western blot | 抗小鼠caspase-1抗体 | Adipogen | AG-20B-0042 |
| 抗NLRP3抗体 | Adipogen | AG-20B-0014 | |
| 抗小鼠IL-1β抗体 | R&D Systems | AF-401-NA | |
| 抗ASC抗体 | Cell Signaling Technology | 67824 | |
| GLUT9多克隆抗体 | Proteintech | 26486-1-AP | |
| ABCG2多克隆抗体 | Proteintech | 27286-1-AP | |
| URAT1多克隆抗体 | Proteintech | 14937-1-AP | |
| GAPDH单克隆抗体 | Proteintech | 60004-1-Ig | |
| Lamin B1多克隆抗体 | Proteintech | 12987-1-AP | |
| 山羊抗小鼠IgG | Proteintech | SA00001-1 | |
| 山羊抗兔IgG | Proteintech | SA00001-2 | |
| 仪器设备 | ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色谱 | Waters | -- |
| ACQUITY UPLC BEH-C18色谱柱 | Waters | -- | |
| 质谱仪（Waters XEVO G2-QTOF） | Waters | -- | |
| ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱 | Waters | -- | |
| Q Exactive质谱仪 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Tecan Infinite 200Pro酶标仪 | Tecan | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 体外BMDM炎症小体实验 | BMDM分化条件（M-CSF浓度50 ng/mL）、细胞密度、LPS priming时间（4小时）、ERE含药血清浓度及处理时间（1小时）、激动剂种类及浓度 阅读提示：Methods 2.4.2, 2.4.3, Figure 1A, Figure 2 |
| 体内HUA/痛风模型 | 小鼠品系、周龄、体重、PO剂量（250 mg/kg）、HFD类型、MSU剂量（2 mg/0.1 mL）、ER给药剂量（0.375/0.75 g/kg）及时间（第28-37天）、样本量（n=6） 阅读提示：Methods 2.5, Figure 1B |
| 肾组织代谢组学 | 色谱柱型号、流动相梯度、质谱参数（喷雾电压、毛细管温度等）、QC样本使用、数据采集模式 阅读提示：Methods 2.6, Table 1, Table 2 |
| Western blot | 抗体信息、稀释比例（原文未明确说明）、蛋白上样量、转膜条件、曝光条件 阅读提示：Methods 2.2, Figure legends 3-6 |