样本收集与诊断确认
获取结核性淋巴结炎患者淋巴结活检标本并确认诊断
从印度尼西亚泗水Vincentius A Paulo医院病理科档案中收集27例结核性淋巴结炎活检标本，基于临床标准（淋巴结肿大）和组织学特征（结核性肉芽肿）诊断，并通过抗酸杆菌直接涂片确认。
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结核性淋巴结炎患者趋化因子和细胞因子表达模式的特征分析
Characterization of chemokine and cytokine expression pattern in tuberculous lymphadenitis patient.
实验完整度
中研究包含27例患者样本的免疫组化染色及半定量分析（ImageJ）和人工计数，进行了相关性分析，但仅为一个队列的观察性研究，缺乏功能验证和机制实验。
主要模型
结核性淋巴结炎患者淋巴结活检标本（27例）
重点核对
样本类型：27例结核性淋巴结炎淋巴结活检 诊断标准：临床标准及结核性肉芽肿组织学特征 免疫组化抗体：anti-CCL-5（E-AB-17864）、anti-CCR-2（E-AB-40273）、anti-IL-6（E-AB-30095）、anti-IL-10（E-AB-40016）、anti-STAT-3（E-AB-22119）、anti-SOCS-3（E-AB-65703），均来自Elabscience 半定量分析阈值：ImageJ分析中阈值设为155 统计分析：Spearman秩相关，p<0.05为显著
摘要
引言：C-C趋化因子受体2（CCR-2）和C-C趋化因子配体5（CCL-5）在单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和活化T细胞抗结核分枝杆菌（M.tb）的迁移中发挥重要作用。同时，在结核病（TB）感染中，由白细胞介素（IL）-6和IL-10激活的信号转导和转录激活因子3（STAT-3）和细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS-3）在吞噬作用、炎症和肉芽肿形成过程中发挥重要作用，这些过程可能导致TB治疗成功或失败。然而，目前尚无关于这些标志物在结核性淋巴结炎中表达的数据。这些标志物的特征分析对于理解结核性淋巴结炎的归巢机制奠定基础至关重要。研究目的：本研究的具体目标是表征CCR-2-CCL-5、IL-6、IL-10、STAT-3和SOCS-3在结核性淋巴结炎中的表达模式。方法：本研究对27例结核性淋巴结炎淋巴结活检标本进行。结核性淋巴结炎的诊断基于临床标准和结核性肉芽肿特征性组织学特征的存在。随后，用CCR-2、CCL-5、IL-6、IL-10、STAT-3和SOCS-3进行免疫组织化学染色。对IHC图像进行半定量分析，以检查染色制剂中的蛋白表达。同时对手动计数表达。结果：与正常区域相比，淋巴细胞和巨噬细胞均强表达CCR-2、CCL-5和IL-6，而IL-10、STAT-3和SOCS-3表达低。CCR-2与IL-6（p=0.83）和IL-10（p=0.83）存在强正相关。结论：结核性淋巴结炎的慢性感染过程以IL-10低、STAT-3低、SOCS-3低、CCR-2高、CCL-5高和IL-6高为特征。临床试验注册：Clinicaltrials.gov，标识符NCT05202548。
实验结论
提炼研究问题、关键发现与证据，快速把握文章的核心贡献。
- 研究问题
- CCR-2、CCL-5、IL-6、IL-10、STAT-3和SOCS-3在结核性淋巴结炎中的表达模式如何？
- 核心机制
- 结核性淋巴结炎的慢性感染过程表现为IL-10低、STAT-3低、SOCS-3低，而CCR-2高、CCL-5高、IL-6高，且CCR-2与IL-6和IL-10呈正相关。
- 主要证据
- 基于27例结核性淋巴结炎淋巴结活检标本的免疫组化染色和半定量分析，发现与正常区域相比，CCR-2、CCL-5和IL-6强表达，而IL-10、STAT-3和SOCS-3弱表达；Spearman相关分析显示CCR-2与IL-6（p=0.83）和IL-10（p=0.83）呈强正相关。
- 研究意义
- 该研究为理解结核性淋巴结炎的归巢机制提供了基础，可能有助于基于免疫参数的临床方法用于结核性淋巴结炎患者的诊断和治疗监测。
研究路径
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
免疫组织化学染色
检测CCR-2、CCL-5、IL-6、IL-10、STAT-3和SOCS-3在结核性淋巴结炎组织中的表达
将标本切成5μm厚的平行切片，分别进行苏木精-伊红染色和Ziehl-Neelsen染色。随后进行免疫组化染色，使用特异性一抗（anti-CCL-5、anti-CCR-2、anti-IL-6、anti-IL-10、anti-STAT-3、anti-SOCS-3），采用生物素化羊抗多价抗体和链霉亲和素过氧化物酶检测，DAB显色。
相对表达分析（半定量）
定量蛋白表达水平并验证表达特异性
使用ImageJ软件对免疫组化图像进行半定量分析，采用去卷积方法，设置阈值减少背景信号，测量平均灰度值代表特异信号。将每个患者制备中的非表达区域作为阴性对照进行比较。
细胞计数
比较淋巴细胞和巨噬细胞中标志物阳性细胞数量
由两名病理学家在×400放大倍数下，于10个视野中手动计数表达CCL-5、CCR-3（应为CCR-2，原文献如此）、IL-6、IL-10、STAT-3、SOCS-3的细胞，分别计数淋巴细胞和巨噬细胞阳性群体。
相关性分析
评估CCR-2与IL-6和IL-10表达的相关性
使用GraphPad Prism和SPSS 22软件进行统计分析，采用Student's t检验和Levene方差齐性检验，使用Spearman等级相关系数分析CCR-2表达与IL-6或IL-10之间的相关性。
研究方法
按研究目的归类文中使用的方法，便于定位所需技术。
产品清单
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组织化学染色 | 抗CCL-5多克隆抗体 | Elabscience | E-AB-17864 |
| 抗CCR-2多克隆抗体 | Elabscience | E-AB-40273 | |
| 抗IL-6多克隆抗体 | Elabscience | E-AB-30095 | |
| 抗IL-10多克隆抗体 | Elabscience | E-AB-40016 | |
| 抗STAT-3单克隆抗体 | Elabscience | E-AB-22119 | |
| 抗SOCS-3多克隆抗体 | Elabscience | E-AB-65703 | |
| DAB Plus显色剂 | Elabscience | -- | |
| DAB Plus底物 | Elabscience | -- | |
| 相对表达分析 | ImageJ软件 | -- | -- |
| 统计分析 | GraphPad Prism软件 | -- | -- |
| SPSS 22软件 | -- | -- |
关键环节
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本收集与诊断 | 样本量（27例）、诊断标准（临床标准+组织学特征）、抗酸杆菌涂片确认 阅读提示：Methods部分 |
| 免疫组织化学染色 | 切片厚度（5μm）、抗原修复条件（柠檬酸缓冲液pH 6.0，750W 10分钟，350W 15分钟）、一抗类型和浓度（制造商方案）、DAB显色时间（15分钟） 阅读提示：Methods：Immunohistochemical assay for tuberculous lymphadenitis specimen |
| 相对表达分析 | ImageJ分析参数（去卷积方法、阈值155） 阅读提示：Methods：Relative expression measurement of tuberculous lymphadenitis specimen |
| 细胞计数 | 放大倍数（×400）、视野数（10个）、计数细胞类型（淋巴细胞和巨噬细胞） 阅读提示：Methods：Immunohistochemical assay for tuberculous lymphadenitis specimen |
| 统计分析 | 相关性分析方法（Spearman秩相关）、显著性水平（p<0.05） 阅读提示：Methods：Correlation analysis |