PD模型建立
通过单侧6-OHDA注射建立帕金森病大鼠模型,模拟PD病理特征。
雄性SD大鼠在右侧MFB注射6-OHDA(9 μg/3 μl)诱导PD,术后6周通过阿扑吗啡诱导旋转测试确认模型成功(对侧旋转>100次/小时)。
Probiotic Supplementation Facilitates Recovery of 6-OHDA-Induced Motor Deficit via Improving Mitochondrial Function and Energy Metabolism.
研究包含动物模型(6-OHDA诱导PD大鼠)、功能验证(旋转、步态测试)、机制验证(线粒体功能、抗氧化酶、SCFAs)以及生化分析(血清生化)。实验分组对照明确(NC、PD、L、AP-32、RM、A-RM)。
单侧6-OHDA诱导的帕金森病大鼠模型 (Sprague-Dawley) L-多巴处理的帕金森病大鼠模型
6-OHDA注射剂量:9 μg/rat,注射于右侧内侧前脑束(MFB),坐标AP −4.4 mm, ML 1.2 mm, DV −7.8 mm 补充剂剂量:AP-32 1.03 × 10^9 CFU/kgBW, RM 62 mg/kgBW,每日灌胃,持续8周 L-DOPA治疗剂量:8 mg/kgBW L-DOPA + 15 mg/kgBW benserazide,腹腔注射,每周3次,持续8周 阿扑吗啡诱导旋转测试剂量:0.5 mg/kgBW,皮下注射,记录1小时 样本量:每组5只大鼠
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
通过单侧6-OHDA注射建立帕金森病大鼠模型,模拟PD病理特征。
雄性SD大鼠在右侧MFB注射6-OHDA(9 μg/3 μl)诱导PD,术后6周通过阿扑吗啡诱导旋转测试确认模型成功(对侧旋转>100次/小时)。
评估AP-32、RM和A-RM长期补充对PD进展的影响。
PD大鼠随机分为5组,分别接受AP-32、RM、A-RM灌胃或L-DOPA腹腔注射,持续8周。
评价补充剂对PD大鼠运动功能的影响。
在补充4周和8周时进行阿扑吗啡诱导旋转测试,8周后进行Catwalk步态分析。
评估多巴胺能神经元存活情况。
通过免疫组化染色检测纹状体和黑质致密部的酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞。
评估补充剂对脑和肌肉线粒体功能的影响。
使用Seahorse XFe24分析脑和比目鱼肌的基线耗氧率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)。
评估血清生化指标、抗氧化酶活性和粪便短链脂肪酸水平。
使用自动分析仪检测血清生化指标,使用试剂盒检测GPx和SOD活性,使用HPLC检测粪便SCFAs。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 诱导PD模型 | 6-羟基多巴胺 | Sigma-Aldrich | 9 |
| 抗坏血酸 | -- | -- | |
| 立体定位注射 | 汉密尔顿注射器 | -- | 10 |
| 组织学分析 | 抗酪氨酸羟化酶抗体 | Elabscience | E-AB-70077 |
| 山羊抗兔IgG-HRP | Sigma | B7401 | |
| DAB底物试剂盒 | Vector | -- | |
| Permount封片剂 | Fisher Scientific | -- | |
| 线粒体功能检测 | Seahorse XFe24细胞外流量分析仪 | Seahorse Bioscience | -- |
| XFe24胰岛捕获微板 | Seahorse Bioscience | 101122-100 | |
| XF校准液 | Seahorse Bioscience | 100867-000 | |
| Seahorse XF检测培养基 | Seahorse Bioscience | 102365-100 | |
| 蛋白定量 | Bradford蛋白定量试剂 | Thermo Scientific | -- |
| 牛血清白蛋白 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 抗氧化酶活性检测 | 谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 | BioVision | -- |
| 超氧化物歧化酶检测试剂盒 | BioVision | -- | |
| 生化分析 | 富士NX500i自动分析仪 | Fujifilm | NX500i |
| 步态分析 | GaitLab ViewPoint步态分析系统 | ViewPoint | -- |
| 体成分分析 | 双能X线吸收仪 | Lunar Hologic, GE Healthcare | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| PD模型建立 | 6-OHDA剂量、注射坐标、注射速度,以及模型成功标准(对侧旋转>100次/小时) 阅读提示:参见Materials and Methods中的Unilateral 6-OHDA Injection Into the Right MFB和Animal Grouping |
| 补充剂干预 | AP-32、RM、A-RM的剂量、给药途径(口服灌胃)、频率(每天)和持续时间(8周);L-DOPA的剂量、给药途径(腹腔注射)、频率(每周3次)和持续时间 阅读提示:参见Materials and Methods中的Animal Grouping |
| 行为学评估 | 阿扑吗啡剂量(0.5 mg/kgBW)、给药途径(皮下)、旋转记录时间(1小时);Catwalk步态分析的参数设置(如速度、步长等) 阅读提示:参见Materials and Methods中的Apomorphine-Induced Rotation Test和Catwalk Quantitative Gait Analysis Test |
| 组织学分析 | 脑切片位置(纹状体、SNc)、一抗稀释度(1:300)、二抗稀释度(1:100)、孵育时间和温度 阅读提示:参见Materials and Methods中的Immunohistochemistry Staining and Image Analysis |
| 线粒体功能检测 | 组织来源(脑、比目鱼肌)、培养基成分(葡萄糖5.0 mM、丙酮酸2.0 mM)、OCR和ECAR的测量条件 阅读提示:参见Materials and Methods中的Mitochondrial Function by Seahorse Bioscience XFe24 Extracellular Flux Analysis |