二至天癸方通过调节线粒体稳态和抑制铁死亡减轻年龄相关性卵巢衰老

目的：本研究旨在探讨二至天癸方（EZTG）对小鼠年龄相关性卵巢衰老的药理作用及机制。方法：本研究以自然衰老小鼠为模型，采用EZTG灌胃给药。通过苏木精-伊红染色评估卵巢病理变化及卵泡储备，通过酶联免疫吸附测定法检测血清激素水平（抗缪勒管激素、卵泡刺激素）、线粒体活性氧（ROS）和线粒体DNA（mtDNA）损伤标志物8-羟基-2'-脱氧鸟苷（8-OHdG）以及脂质过氧化标志物谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）。使用流式细胞术检测卵巢中线粒体膜电位（MMP）水平。使用免疫荧光染色观察PINK1和Parkin的水平。使用电子显微镜观察线粒体来源囊泡（MDVs）和线粒体形态。使用普鲁士蓝染色观察卵巢组织中的铁离子聚集。铁测定试剂盒检测总铁水平。Western blot用于检测线粒体和铁死亡相关基因的蛋白表达。结果：EZTG治疗后，衰老小鼠卵巢储备增加，血清激素水平改善，MMP、GSH水平升高，线粒体ROS、8-OHdG和MDA水平降低。免疫荧光染色显示PINK1和Parkin水平降低，Western blot观察到相同趋势。同时，电子显微镜显示EZTG改善了衰老小鼠卵巢的线粒体形态。EZTG还降低了衰老小鼠卵巢中总铁和长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）的蛋白水平，并升高了谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的蛋白水平。结论：EZTG可以维持PINK1/Parkin介导的线粒体稳态，减少ROS积累引起的脂质过氧化，并抑制铁死亡的发生，延缓卵巢衰老。这些发现表明，EZTG可能是治疗女性年龄相关性卵巢衰老的有前景的药物。