亚毒性剂量对乙酰氨基酚联合运动对大鼠肝脏的影响

The effects of subtoxic dose of acetaminophen combined with exercise on the liver of rats.

作者信息I Aksu, M Kiray, C Gencoglu, A Tas, O Acikgoz
PMID37449750
发布时间2023-07-14
DOI10.33549/physiolres.935091

实验完整度

研究包含动物模型、生化检测(MDA、GSH、Sirt1、VEGF)和组织学评估,但缺少机制验证(如Sirt1通路干预)及多证据层级。

主要模型

雄性Wistar大鼠模型 急性运动模型(跑步机) 急性力竭运动模型(跑步机)

重点核对

APAP剂量:250 mg/kg,腹腔注射 运动方案:急性运动(10 m/min,5%坡度,1小时);力竭运动(25 m/min直至力竭) 分组:对照组、APAP组、AEx组、AEEx组、AEx+APAP组、AEEx+APAP组,每组7只 APAP给药时间:运动后立即 取材时间:运动后4小时

摘要

经常进行体育锻炼对身体有益。急性运动通过造成氧化剂与抗氧化剂水平之间的不平衡状态,在包括肝脏在内的许多组织中引起氧化应激。镇痛药常用于减轻运动后的疼痛。对乙酰氨基酚(APAP)作为一种常用的非处方镇痛药,可引起肝毒性。本研究旨在探讨在急性力竭运动后给予亚毒性剂量APAP对大鼠肝脏的影响及其潜在机制。雄性Wistar大鼠(体重200–250 g)分为6组,每组7只:对照组、APAP组(250 mg/kg,腹腔注射)、急性运动组(AEx)、急性力竭运动组(AEEx)、急性运动+APAP组(AEx+APAP)和急性力竭运动+APAP组(AEEx+APAP)。大鼠在跑步机上进行中等强度或力竭运动,然后给予APAP。与对照组相比,AEEx、AEx+APAP和AEEx+APAP组组织MDA水平显著升高。各组间GSH水平无显著差异。APAP、AEx和AEEx组组织Sirtuin1(Sirt1)水平显著低于对照组。各组间VEGF水平无显著差异。与对照组相比,所有组的肝损伤评分均显著升高。结果表明,单独给予亚毒性剂量APAP或与急性或力竭跑台运动联合使用,可通过影响Sirt1水平且不影响VEGF水平,引起氧化性肝损伤。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
亚毒性剂量APAP联合急性或力竭运动是否影响大鼠肝脏氧化应激及Sirt1和VEGF水平?
核心机制
亚毒性剂量APAP联合运动通过降低肝脏Sirt1水平,增加氧化应激(MDA升高)而不影响VEGF水平,导致肝损伤。
主要证据
雄性Wistar大鼠分组实验显示,AEEx、AEx+APAP和AEEx+APAP组MDA水平显著升高,APAP、AEx和AEEx组Sirt1水平显著降低,肝损伤评分升高,VEGF无显著变化。
研究意义
研究提示亚毒性剂量APAP与运动联用可能通过影响Sirt1和氧化应激导致肝损伤,需进一步研究阐明分子机制。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

动物分组与处理

建立不同处理模型以评估APAP和运动对肝脏的影响

雄性Wistar大鼠分为6组:对照组、APAP组(250 mg/kg,ip)、AEx组(10 m/min,5%坡度,1小时)、AEEx组(25 m/min直至力竭)、AEx+APAP组、AEEx+APAP组,每组7只。运动组进行5天适应性训练,之后进行急性或力竭运动,运动后立即给予APAP。

2

取材与组织处理

获取肝脏样本进行生化及组织学检测

运动后4小时处死大鼠,取出肝脏,分为两部分:一部分用于组织学检查,另一部分匀浆用于生化评估。

3

生化指标检测

评估氧化应激、抗氧化水平及肝损伤标志物

检测肝脏MDA、GSH水平,血清ALT和AST水平,以及肝脏Sirt1和VEGF蛋白水平。

4

组织学评估

评估肝组织病理损伤程度

肝脏样本经福尔马林固定、石蜡包埋、切片(5 μm),进行H&E和Masson三色染色,并在光镜下半定量评分(0-3级)。

5

统计分析

比较各组间差异

使用SPSS 27.0进行单因素方差分析(ANOVA)和LSD事后检验,非正态数据使用Kruskal Wallis检验,p<0.05为显著。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
对乙酰氨基酚Bristol-Myers Squibb--
Bioxytech MDA-586试剂盒Oxis International--
GSH-420试剂盒Oxis International--
Pierce BCA蛋白检测试剂盒Thermo Scientific23227
大鼠Sirtuin 1 ELISA试剂盒ElabscienceE-EL-R1102
大鼠VEGF ELISA试剂盒Sunred Biotechnology201-11-0660
超声波匀浆器Bandelin Sonopuls--
分光光度计--T80
酶标仪BioTekELx800
贝克曼库尔特AU5800分析仪Beckman Coulter--
切片机Thermo ScientificFinesse

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
动物分组与处理
大鼠品系、性别、体重范围;分组(6组,每组7只);APAP剂量(250 mg/kg,腹腔注射);运动方案(急性运动:10 m/min,5%坡度,1小时;力竭运动:25 m/min直至力竭);APAP给药时间(运动后立即);取材时间(运动后4小时)
阅读提示:Methods中Animal分组部分
生化检测
MDA检测试剂盒(Bioxytech MDA-586)及检测波长(586 nm);GSH检测试剂盒(GSH-420)及检测波长(420 nm);Sirt1和VEGF ELISA试剂盒(货号:E-EL-R1102,201-11-0660)及检测波长(450 nm);蛋白定量方法(Pierce BCA试剂盒);ALT/AST检测方法(Beckman Coulter AU5800)
阅读提示:Methods中Biochemical evaluation部分
组织学评估
固定条件(10%福尔马林,室温48小时);切片厚度(5 μm);染色方法(H&E,Masson三色);评分标准(0-3级,包括充血、单核细胞浸润、核固缩、窦状隙扩张)
阅读提示:Methods中Histological evaluation部分及Figure legends(Figure 1, Figure 2)