靶向μ-阿片受体的单克隆抗体通过增强吗啡诱导的受体内吞减轻吗啡耐受

吗啡是一种常用的镇痛药，通过激活μ-阿片受体（MOR）发挥作用，但其具有耐受性等显著副作用。尽管吗啡诱导MOR内吞的效率低下是吗啡耐受发生的基础，但目前尚无有效治疗吗啡耐受的方法。在本研究中，我们旨在开发一种精确靶向MOR的单克隆抗体（mAb），并确定其对吗啡耐受的治疗效果及潜在分子机制。我们通过杂交瘤技术，采用DNA免疫联合细胞免疫的策略，成功制备了靶向MOR的单克隆抗体，命名为3A5C7，并鉴定其为免疫球蛋白G单克隆抗体，对MOR具有高特异性和亲和力，且能结合具有空间构象的抗原。用3A5C7处理HEK293T和SH-SY5Y两种细胞系后，通过免疫荧光染色、流式细胞术、Western blotting、免疫共沉淀和基于小干扰RNA（siRNA）的敲低实验证明，3A5C7通过G蛋白偶联受体激酶2（GRK2）/β-arrestin2依赖机制增强吗啡诱导的MOR内吞。该单克隆抗体还允许MOR从细胞质回收到质膜，并减弱吗啡诱导的MOR磷酸化。我们使用视黄酸诱导的分化SH-SY5Y细胞建立了体外吗啡耐受模型。Western blot、酶联免疫吸附测定和siRNA敲低实验显示，3A5C7单克隆抗体通过GRK2/β-arrestin2通路减弱了腺苷酸环化酶过度活化（吗啡耐受的体外生物标志物）。此外，体内热板实验表明，慢性鞘内注射3A5C7能显著减轻小鼠的吗啡耐受，戒断跳跃实验显示，慢性和急性鞘内注射3A5C7均能减轻吗啡依赖。最后，鞘内电穿孔递送沉默短发夹RNA证明，3A5C7在体内的抗耐受和抗依赖效果是通过GRK2/β-arrestin2通路增强吗啡诱导的MOR内吞所介导的。总之，我们的研究提供了一种靶向MOR的治疗性单克隆抗体3A5C7，通过增强吗啡诱导的MOR内吞来治疗吗啡耐受。3A5C7单克隆抗体显示出治疗临床吗啡耐受的转化价值。