制备雪莲果叶提取物
获得用于实验的YLE
新鲜雪莲果叶干燥、粉碎后,用70%乙醇浸渍提取,过滤、浓缩得到提取物。
Protective effect of yacon leaves extract (Smallanthus sonchifolius (Poepp.) H. Rob) through antifibrosis, anti-inflammatory, and antioxidant mechanisms toward diabetic nephropathy.
包括体外细胞模型、ELISA和qRT-PCR验证,但缺少动物模型和临床样本验证。
SV40 MES 13小鼠系膜细胞系
葡萄糖诱导浓度:20 mM YLE处理浓度:5、10、50 µg/mL 处理时间:5天 阳性对照:葡萄糖诱导的系膜细胞 阴性对照:正常细胞
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获得用于实验的YLE
新鲜雪莲果叶干燥、粉碎后,用70%乙醇浸渍提取,过滤、浓缩得到提取物。
模拟糖尿病肾病环境
使用SV40 MES 13小鼠系膜细胞,用20 mM葡萄糖诱导建立DN细胞模型,并设置正常细胞作为阴性对照。
评估YLE对DN细胞模型的作用
用不同浓度YLE(5、10、50 µg/mL)处理葡萄糖诱导的系膜细胞,观察细胞形态、增殖变化。
评估YLE对TGF-β1、TNF-α和MDA水平的影响
使用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中TGF-β1、TNF-α和MDA的水平,并通过总蛋白定量校准。
评估YLE对SMAD2、SMAD3、SMAD4和SMAD7基因表达的影响
提取RNA,反转录成cDNA,使用qRT-PCR分析SMAD2、SMAD3、SMAD4和SMAD7的相对表达,以GAPDH为内参。
评估组间差异的显著性
使用SPSS 16.0进行单因素方差分析,采用Tukey和Dunnet-T3事后检验。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | DMEM培养基 | Biowest | L0103-500 |
| F12-K混合营养培养基 | Biowest | L0135-500 | |
| 胎牛血清 | Biowest | S1810-500 | |
| 庆大霉素 | Gibco | 15750060 | |
| 抗生素-抗真菌剂 | Biowest | L0010-100 | |
| 6孔板 | Corning Costar | 3516 | |
| YLE制备 | 食品脱水机 | LocknLock | EJO316 |
| 旋转蒸发器 | Zhengzhou Well-known | RE-201D | |
| 总蛋白测定 | 牛血清白蛋白标准品 | Sigma Aldrich | A9576 |
| Quick start染料试剂1X | Bio-Rad | 5000205 | |
| Multiskan GO酶标仪 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| ELISA | 小鼠TGF-β1 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-M0051 |
| 小鼠TNF-α ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-M0049 | |
| 小鼠MDA ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-0060 | |
| RNA提取 | RNA提取试剂盒 | Zymo | R2073 |
| cDNA合成 | IScript逆转录预混液 | Bio-Rad | 170-8841 |
| qRT-PCR | SsoFast EvaGreen预混液 | Bio-Rad | 172-5200 |
| AriaMx实时荧光定量PCR仪 | Agilent | MY202205294 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 细胞培养与诱导 | SV40 MES 13细胞来源、培养基组成、细胞密度、葡萄糖浓度、处理时间 阅读提示:Materials and Methods中的Preparation of DN cells model |
| YLE制备 | 干燥温度和时间、乙醇浓度、提取时间、浓缩温度 阅读提示:Materials and Methods中的YLE preparation |
| 蛋白水平检测 | ELISA试剂盒品牌和货号、检测波长、上样量 阅读提示:Materials and Methods中的TGF-β1, TNF-α, and MDA assays |
| 基因表达分析 | RNA提取试剂盒、cDNA合成试剂、qRT-PCR预混液、引物序列、内参基因、循环条件 阅读提示:Materials and Methods中的SMADs genes expressions measurements |
| 统计分析 | 统计软件、方差分析类型、事后检验方法、显著性水平 阅读提示:Materials and Methods中的Statistical analysis |