研究设计与样本收集
确定研究人群并收集术前血液样本,以评估hnRNPA2/B1水平。
纳入2021年9月至2022年7月接受腰椎减压融合术的161例老年患者,根据排除标准筛选,最终138例纳入分析。在麻醉诱导前采集EDTA-K2抗凝血,分离血浆和PBMC。
Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1 as a novel biomarker in elderly patients for the prediction of postoperative neurocognitive dysfunction: A prospective nested case-control study.
该研究包含临床患者样本的多种检测(ELISA、流式、qRT-PCR)和统计分析,但缺乏独立功能验证或动物模型等第二层级证据。
老年腰椎减压融合术患者 外周血单个核细胞(PBMC)
术前血浆hnRNPA2/B1浓度(ELISA,SBJ-H2321试剂盒) PBMC中hnRNPA2/B1的mRNA表达水平(qRT-PCR,β-actin为内参) PBMC淋巴细胞和单核细胞中hnRNPA2/B1中位荧光强度(流式细胞术) PND诊断标准:术后7天和3个月神经认知评分较基线下降超过一个标准差 样本量:共纳入161名患者,最终分析138名
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
确定研究人群并收集术前血液样本,以评估hnRNPA2/B1水平。
纳入2021年9月至2022年7月接受腰椎减压融合术的161例老年患者,根据排除标准筛选,最终138例纳入分析。在麻醉诱导前采集EDTA-K2抗凝血,分离血浆和PBMC。
评估术前及术后认知功能,定义PND的发生。
术前1天、术后7天、术后3个月进行神经心理测试(MMSE、MoCA、IADL、CDR),根据认知评分下降是否超过一个标准差将患者分为PND组和非PND组。
定量检测术前血浆和PBMC中hnRNPA2/B1的水平。
采用ELISA检测血浆hnRNPA2/B1和Aβ42浓度;采用流式细胞术检测PBMC中hnRNPA2/B1的中位荧光强度;采用qRT-PCR检测hnRNPA2/B1 mRNA水平。
分析hnRNPA2/B1对PND的预测价值,并确定其是否为独立危险因素。
使用ROC曲线评估hnRNPA2/B1和Aβ42的预测价值,并通过多因素logistic回归分析确定独立危险因素。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 样本采集 | EDTA-K2抗凝真空管 | -- | -- |
| 样本制备 | 人淋巴细胞分离液 | Solarbio | P8610 |
| 1×磷酸盐缓冲液 | Solarbio | FZ1258 | |
| 流式细胞术 | 细胞固定和破膜试剂 | Thermo Fisher Scientific | 00-5523-00 |
| 抗hnRNPA2/B1一抗 | Abcam | ab259894 | |
| 兔单克隆IgG同型对照 | Abcam | ab172730 | |
| 山羊F(ab')2抗兔IgG(DyLight® 488) | Abcam | ab98507 | |
| ELISA | hnRNPA2/B1 ELISA试剂盒 | SenBeiJia | SBJ-H2321 |
| Aβ42 ELISA试剂盒 | Elabscience | E-EL-H543c | |
| 分光光度计 | PerkinElmer | -- | |
| qRT-PCR | TRIzol试剂 | Thermo Fisher Scientific | 15596026 |
| 逆转录试剂盒 | Takara | RR036A | |
| SYBR Premix Ex Taq II | Takara | RR820A | |
| ABI 7500仪器 | Applied Biosystems | -- | |
| PCR引物 | Sangon Biotech | -- | |
| 统计分析 | SPSS 25.0软件 | IBM Corp. | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者纳入与排除标准 | 年龄>65岁,接受腰椎减压融合术;排除标准包括严重疾病、精神疾病、痴呆等 阅读提示:Methods: Participants |
| 认知评估与PND分组 | 使用MMSE、MoCA、IADL、CDR进行测试;PND定义为术后认知评分较基线下降超过一个标准差 阅读提示:Methods: Cognition assessment |
| 样本采集与处理 | 麻醉诱导前采集EDTA-K2抗凝血;离心3000g 10分钟;PBMC分离使用淋巴细胞分离液 阅读提示:Methods: Sample preparation |
| hnRNPA2/B1检测 | ELISA检测血浆浓度;流式检测PBMC中位荧光强度;qRT-PCR检测mRNA水平 阅读提示:Methods: Flow cytometry, Enzyme linked immunosorbent assay, Quantitative real-time polymerase chain reaction |
| 统计分析 | 多因素logistic回归;ROC曲线;统计软件SPSS 25.0;显著性水平P<0.05 阅读提示:Methods: Statistical analysis |