样本采集与细胞分离
获取同一供体的DAs和ADSCs以进行对比
从三位健康女性腹部或大腿的肿胀吸脂术获取皮下脂肪组织,通过胶原酶消化和离心分离获得基质血管组分(SVF)和成熟脂肪细胞(MAs),分别培养ADSCs和DAs。
Differentiation potential and mRNA profiles of human dedifferentiated adipose cells and adipose‑derived stem cells from young donors.
包含细胞分离培养、增殖、表型、多向分化及转录组测序等实验,但缺乏动物或体内验证,机制研究有限。
人去分化脂肪细胞(DAs) 人脂肪来源干细胞(ADSCs)
细胞来源:3例年轻女性(23-30岁,BMI 19.1-23.9)的皮下脂肪组织 细胞传代:6-7代 分化诱导:成脂、成骨、成软骨、成肌条件 对照组:同一供体的DAs和ADSCs配对比对 统计标准:P<0.05
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取同一供体的DAs和ADSCs以进行对比
从三位健康女性腹部或大腿的肿胀吸脂术获取皮下脂肪组织,通过胶原酶消化和离心分离获得基质血管组分(SVF)和成熟脂肪细胞(MAs),分别培养ADSCs和DAs。
比较DAs和ADSCs的增殖速率和表面标志物表达
使用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性;通过流式细胞术检测CD90、CD44、CD105、CD31、CD34和CD45的表达。
评估DAs和ADSCs成脂、成骨、成软骨和成肌分化能力
分别使用成脂、成骨、成软骨和成肌诱导培养基进行分化,并通过油红O、茜素红S、阿尔辛蓝和Desmin免疫荧光染色进行半定量分析。
比较DAs和ADSCs的基因表达谱并筛选差异表达基因
提取总RNA,进行Illumina NovaSeq平台RNA-seq,通过edgeR包筛选DEGs,并利用GO和KEGG富集分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞培养 | 胶原酶I | -- | -- |
| DMEM/F12培养基 | HyClone | -- | |
| 胎牛血清 | Biological Industries | -- | |
| 细胞增殖检测 | CCK-8试剂盒 | Dojindo Molecular Technologies | -- |
| 流式细胞术 | 抗CD90抗体 | Elabscience | E-AB-F1167D |
| 抗CD44抗体 | Elabscience | E-AB-F1038D | |
| 抗CD31抗体 | Elabscience | E-AB-F1050C | |
| 抗CD34抗体 | Elabscience | E-AB-F1143C | |
| 抗CD45抗体 | Elabscience | E-AB-F1137C | |
| 抗CD105抗体 | eBioscience | 12-1057-41 | |
| BD FACS Aria II流式细胞仪 | BD Biosciences | -- | |
| 成脂分化 | 成脂分化培养基 | Cyagen Biosciences | -- |
| 油红O | -- | -- | |
| 成骨分化 | 成骨分化培养基 | Cyagen Biosciences | -- |
| 茜素红S | -- | -- | |
| 氯化十六烷基吡啶 | -- | -- | |
| 成软骨分化 | 成软骨分化培养基 | Cyagen Biosciences | -- |
| 阿尔辛蓝 | -- | -- | |
| 成肌分化 | 马血清 | Gibco | -- |
| 地塞米松 | -- | -- | |
| 氢化可的松 | -- | -- | |
| 抗desmin抗体 | Abcam | ab32362 | |
| Cy3标记山羊抗兔IgG抗体 | Beyotime Institute of Biotechnology | -- | |
| DAPI染料 | -- | -- | |
| RNA-seq | TRIzol试剂 | Thermo Fisher Scientific | 15596026 |
| NEBNext Ultra RNA文库制备试剂盒 | NEB | -- | |
| Illumina NovaSeq测序平台 | Illumina | -- | |
| 蛋白定量 | BCA蛋白定量试剂盒 | CW Biosciences | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本采集和细胞分离 | 供体年龄、BMI、取样部位、消化酶浓度和消化时间 阅读提示:Materials and methods: Ethical approval and sample collection; Isolation and culture of DAs and ADSCs |
| 细胞增殖实验 | 细胞接种密度、检测时间点、CCK-8孵育时间 阅读提示:Materials and methods: Cell proliferation assay |
| 免疫表型分析 | 抗体浓度、孵育时间、流式细胞仪设置 阅读提示:Materials and methods: Immunophenotypic assessment using flow cytometry |
| 多向分化诱导 | 分化培养基成分、诱导时间、染色方法 阅读提示:Materials and methods: Multi-lineage differentiation assay |
| RNA-seq | RNA提取方法、文库构建试剂盒、测序平台、差异表达筛选标准 阅读提示:Materials and methods: Comparison of the gene expression profiles between DAs and ADSCs using RNA sequencing |