通过高分析灵敏度微滴数字PCR方法同时检测临床样本中不同人乳头瘤病毒类型并定量病毒DNA载量。

人乳头瘤病毒（HPVs）是小DNA肿瘤病毒，主要感染肛门生殖器和上呼吸道的黏膜上皮。对更具分析性的HPV DNA定量检测方法的需求日益增加。本研究开发了一种新型微滴数字PCR（ddPCR）方法，可同时检测和定量不同HPV类型的HPV DNA。首先使用含有HPV16、HPV18、HPV11和HPV45 DNA的四种重组质粒测试ddPCR的敏感性、准确性、特异性以及批内和批间变异。将该方法扩展到检测/定量宫颈上皮内瘤变（CIN，n=45）标本和人类细胞系（n=4）中的HPV DNA。比较了临床样本的ddPCR和qPCR数据。该检测在检测/定量HPV16/18/11/45 DNA方面表现出高准确性、敏感性和特异性，且批内/批间变异低。ddPCR在51.1%（23/45）的CIN DNA样本中检测到HPV DNA，而qPCR检测出40%（18/45）的CIN为HPV阳性。ddPCR检测为阳性的5例CIN，qPCR检测为阴性。在CIN标本中，ddPCR测定的平均HPV DNA载量为3.81拷贝/细胞（范围0.002–51.02拷贝/细胞），而qPCR为8.04拷贝/细胞（范围0.003–78.73拷贝/细胞）。ddPCR和qPCR在SiHa、CaSki和HeLa细胞中一致检测到HPV DNA，而HaCaT检测为HPV阴性。ddPCR/qPCR在CINs/细胞系中同时检测的HPV DNA载量之间相关性良好（R2 = 0.9706，p < 0.0001）。我们的数据表明，ddPCR是一种有价值的技术，可用于定量CIN标本和人类细胞系中的HPV DNA载量，从而改善临床应用，例如在使用HPV型特异性检测进行HPV相关病变初诊后的患者管理。