IL20RB促进透明细胞肾细胞癌的增殖和迁移,并与免疫浸润相关

IL20RB promotes proliferation and migration in clear cell renal cell carcinoma and is associated with immune infiltration.

作者信息Yufeng Liu, Yingmin Xie, Lingfei Yan, Yang Luo, Dawei Liu, Qing Li, Wu Xu, Tao Wang
PMID41836171
期刊PeerJ
发布时间2026-03-10
DOI10.7717/peerj.20898

实验完整度

包含TCGA数据库分析、体外细胞实验(siRNA敲低、CCK-8、划痕、Transwell)和IHC验证,但缺乏动物模型或体内验证。

主要模型

786-O细胞系 A498细胞系 Caki-1细胞系 HK-2正常肾上皮细胞系

重点核对

TCGA队列中IL20RB表达水平的分组标准(中位数分层) IL20RB siRNA敲低实验序列及转染试剂(siRNA1序列、Rfect V2 siRNA reagent) 细胞培养条件:培养基(DMEM/F-12、MEM、RPMI 1640)及血清添加物(10% FBS) 免疫组化染色使用组织样本数(12对肿瘤及癌旁组织) Western blot抗体信息(IL20RB ER63751, HUABIO, 1:1000;ACTIN 66009-1-Ig, Proteintech, 1:50000)

摘要

背景:IL20RB,即白细胞介素20受体亚基β,作为细胞因子受体亚基编码基因,已被发现在人类恶性肿瘤中发挥重要作用。然而,IL20RB表达与透明细胞肾细胞癌(ccRCC)临床结局及肿瘤浸润淋巴细胞之间的关系仍不清楚。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)汇编了IL20RB在正常和ccRCC组织中的表达数据。利用TCGA数据库检验了IL20RB表达与临床病理特征之间的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线进行生存分析。此外,利用GeneMANIA数据库的数据建立了涉及IL20RB的蛋白质网络。进行了基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,并通过单样本基因集富集分析(ssGSEA)检验了IL20RB与肿瘤免疫浸润的关系。利用肿瘤免疫评估资源(TIMER)和TISIDB数据库进一步检验了肿瘤浸润免疫细胞(TIIC)与IL20RB之间的关系。通过免疫组织化学(IHC)检测肿瘤标本中IL20RB的表达。通过Western blot分析确认肿瘤细胞中IL20RB的表达水平。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和集落形成实验评估了IL20RB对ccRCC细胞活力的影响。伤口愈合和Transwell实验评估了IL20RB对ccRCC细胞迁移的影响。结果:与ccRCC样本相比,肿瘤旁样本的IL20RB表达显著降低。IL20RB表达水平与样本分类、淋巴结状态、肿瘤分化和疾病进展显著相关。IL20RB表达增强与ccRCC患者较差的无病生存期(DSS)和总生存期(OS)相关(p < 0.01)。随后,观察到IL20RB过表达与免疫调节剂、趋化因子以及ccRCC中浸润性Treg、NK CD56细胞、Th1细胞、细胞毒性细胞和T辅助细胞增多之间存在显著关联。IHC显示,癌旁正常组织中的IL20RB水平相对于ccRCC样本显著降低。通过小干扰RNA(siRNA)抑制IL20RB显著降低了ccRCC细胞的增殖和迁移。结论:IL20RB表达升高与ccRCC的不良预后和免疫细胞浸润相关,表明其在免疫治疗策略开发中具有潜在重要性。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
IL20RB在透明细胞肾细胞癌中的表达及其与临床预后和免疫浸润的关系如何?
核心机制
IL20RB通过促进肿瘤细胞增殖和迁移,并可能通过调节免疫细胞浸润(如Treg、巨噬细胞)来影响肿瘤进展。
主要证据
TCGA数据库分析显示IL20RB在ccRCC中高表达且与较差预后相关;IHC和Western blot验证了蛋白表达;体外实验(siRNA敲低、CCK-8、划痕实验、Transwell实验)表明敲低IL20RB抑制细胞增殖和迁移。
研究意义
IL20RB可能作为ccRCC的预后生物标志物和免疫治疗的潜在靶点。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

生物信息学分析

评估IL20RB在ccRCC中的表达及其与临床病理特征和预后的关联。

利用TCGA数据库分析IL20RB表达,进行差异表达、临床相关性、生存分析及免疫浸润分析。

2

免疫组织化学验证

验证IL20RB蛋白在ccRCC组织中的表达水平。

对12例ccRCC患者的肿瘤和癌旁组织进行IHC染色,计算H-score。

3

细胞模型表达分析

检测IL20RB在正常肾细胞和ccRCC细胞系中的表达差异。

通过Western blot和qRT-PCR检测IL20RB在HK-2、A498、Caki-1、786-O细胞中的表达。

4

基因敲低及功能验证

评估IL20RB对ccRCC细胞增殖和迁移的影响。

在786-O细胞中转染IL20RB siRNA,通过CCK-8、集落形成、划痕和Transwell实验检测细胞功能变化。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
DMEM/F-12培养基GibcoWaltham, MA, USA
MEM培养基ProcellWuhan, China
RPMI 1640培养基GibcoWaltham, MA, USA
胎牛血清HyCyteSuzhou, China
青霉素/链霉素InvitrogenWaltham, MA, USA
Rfect V2 siRNA转染试剂BIOGChangzhou, China
RIPA裂解液BeyotimeShanghai, China
BCA蛋白定量试剂盒GLPBIOMontclair, CA, USA
PVDF膜----
超敏ECL试剂盒GLPBIOMontclair, CA, USA
IL20RB抗体HUABIOER63751
ACTIN抗体Proteintech66009-1-Ig
EZ-press RNA纯化试剂盒EZBioscienceHouston, TX, USA
Hifair® III 第一链cDNA合成试剂盒(qPCR用)Yeasen BiotechnologyShanghai, China
ChamQ SYBR qPCR预混液Vazyme BiotechNanjing, China
柠檬酸盐缓冲液BiosharppH 6.0
牛血清白蛋白Biosharp--
二抗DakoGlostrup, Denmark

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
生物信息学分析
TCGA数据获取、IL20RB表达分组标准(中位数)、统计方法(Kruskal-Wallis、Wilcoxon、Cox)
阅读提示:Methods: Acquisition of transcriptomic and clinical datasets, Prognostic significance and construction of predictive models
免疫组化
标本类型(肿瘤及癌旁组织)、病例数(12例)、抗体稀释度(1:100)、抗原修复条件(柠檬酸缓冲液pH6.0)
阅读提示:Methods: Immunohistochemistry
细胞培养
细胞系来源(ATCC)、培养基及血清添加物(10% FBS)、培养条件(37°C, 5% CO2)
阅读提示:Methods: Cell culture and transfection
基因敲低
siRNA序列(siRNA1)、转染试剂(Rfect V2)、敲低效率验证方法(qRT-PCR和Western blot)
阅读提示:Methods: Cell culture and transfection, Western blot, qRT-PCR
功能实验
细胞密度(CCK-8:2×10^4细胞/mL,每孔100μL)、实验时间(CCK-8每隔24小时;划痕0h和24h;Transwell 24h)、重复数(CCK-8六重复)
阅读提示:Methods: Wound healing, Transwell assay, CCK8, Colony formation assay