术后IL-1β升高诱导肠道微环境紊乱和肠道菌群改变

Elevated postoperative IL-1β induces disorder of intestinal microenvironment and alteration of gut microbiota.

作者信息Wanyu Wang, Xinyang Liao, Jin Liu, Bin Liu, Cheng Zhou, Peng Liang
PMID41948039
发布时间2026-03-23
DOI10.3389/fmicb.2026.1744636

实验完整度

包含临床队列(71例胸腔镜手术患者)和多时间点小鼠模型,结合16S rRNA测序、Bugbase表型预测、ELISA、组织缺氧染色、ATP/乳酸检测及IL-1β siRNA/rIL-1β干预等体外和体内验证。

主要模型

胸腔镜手术患者临床队列(71例) 手术/麻醉应激小鼠模型(探索性开腹手术) 小鼠巨噬细胞系(用于siRNA筛选)

重点核对

胸腔镜手术患者:术前术后配对粪便样本,16S rRNA基因测序和Bugbase表型分析 小鼠手术/麻醉应激模型:2.5-3%七氟烷麻醉下开腹手术,2小时麻醉时间 IL-1β siRNA通过尾静脉注射(10 nmol),rIL-1β通过腹腔注射(10 μg/kg) 结肠上皮检测:pimonidazole HCl(60 mg/kg)缺氧染色、ATP和乳酸测定 统计:使用Wilcoxon符号秩检验、线性回归和逻辑回归调整多个混杂因素

摘要

引言 先前的研究提示了术后肠道菌群失调预防的重要性,但其机制仍不清楚,这对预防和治疗构了挑战。本研究旨在探讨术后菌群失调的特征及其潜在机制。 方法 临床队列研究了接受胸腔镜手术患者围手术期肠道菌群的变化及其与外周炎症指标的关系。通过16S rRNA基因测序和Bugbase表型分析对肠道微生物组进行了表征。在实验室研究中,建立了手术/麻醉应激小鼠模型,以进一步研究潜在的机制。 结果 微生物组分析显示,胸腔镜术后α多样性降低,且从专性厌氧菌向需氧菌/兼性厌氧菌转变。术后IL-1β与专性厌氧菌丰度呈负相关,与兼性厌氧菌丰度呈正相关。较高的兼性厌氧菌丰度与术后并发症风险增加和住院时间延长相关。在小鼠模型中,手术和rIL-1β干预复制了临床队列中的氧表型变化,结肠上皮细胞表现ATP水平降低、缺氧染色评分降低,乳酸增加。用IL-1β siRNA下调术后IL-1β减轻了手术/麻醉应激诱导的结肠缺氧环境损伤和肠道菌群氧表型变化。 结论 术后肠道菌群失调涉及肠道菌群从厌氧菌向需氧菌和兼性厌氧菌的表型转变。这种转变可能由IL-1β–结肠上皮氧代谢–结肠氧环境–肠道菌群调节轴驱动,为严重术后并发症的早期风险分层和改善术后恢复的策略提供了潜在见解。 关键词 肠道微生物群,肠道微环境,IL-1β,氧代谢,围手术期炎症 亮点 本研究观察到术后肠道菌群从厌氧菌向需氧/兼性厌氧菌转变,并提示“IL-1β - 结肠上皮氧代谢 - 结肠氧环境 - 肠道菌群”的潜在调节轴,为严重术后并发症的早期识别和危险因素分级以及改善恢复提供了见解。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
手术后肠道菌群失调的特点及其潜在机制是什么?
核心机制
术后IL-1β升高通过影响结肠上皮细胞氧代谢(减少有氧呼吸,增加无氧呼吸),破坏结肠缺氧环境,导致肠道菌群从专性厌氧菌向兼性厌氧菌和需氧菌转变。
主要证据
临床队列中,术后IL-1β水平与专性厌氧菌丰度负相关(r=-0.291,p=0.014),与兼性厌氧菌正相关(r=0.740,p<0.001);小鼠模型中,手术或rIL-1β干预导致结肠上皮ATP降低、乳酸升高、缺氧评分降低,而使用IL-1β siRNA敲低IL-1β可逆转这些变化。
研究意义
为术后并发症的早期风险分层提供了潜在生物标志物,并为通过靶向IL-1β改善术后恢复提供了概念框架。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

临床队列:围手术期肠道菌群变化分析

评估胸腔镜手术患者围手术期肠道菌群组成和氧代谢表型的变化及其与临床预后的关系。

收集71例胸腔镜肺部分切除患者的术前和术后粪便样本,进行16S rRNA基因测序,使用Bugbase预测氧代谢表型,并分析其与术后并发症和住院时间的关联。

2

临床队列:炎症指标与菌群表型关联

探讨术后外周炎症指标(尤其是IL-1β)与肠道菌群氧代谢表型的关系。

通过ELISA检测术后IL-1β和IL-6水平,并与其他炎症指标(TNF-α、CRP、PCT等)一起,与术后菌群氧代谢表型进行相关性和回归分析。

3

动物模型:手术/麻醉应激模型的建立和表型验证

验证手术/麻醉应激是否复制临床观察到的菌群氧代谢表型转变和结肠环境变化。

建立小鼠开腹手术模型,在术后多个时间点(24小时、1周、2周、3周)检测血清和结肠IL-1β水平、粪便细菌总量,并在1周时进行16S测序和结肠组织学检测。

4

机制验证:IL-1β对结肠氧环境和菌群的影响

探讨IL-1β是否直接导致结肠氧环境破坏和菌群表型改变。

通过尾静脉注射IL-1β siRNA(10 nmol)或腹腔注射rIL-1β(10 μg/kg)调节小鼠IL-1β水平,然后检测结肠ATP、乳酸、缺氧评分和菌群表型。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
E.Z.N.A.® 土壤DNA提取试剂盒Omega Bio-tek--
NanoDrop 2000紫外可见分光光度计Thermo Scientific--
ABI GeneAmp® 9700 PCR热循环仪ABI--
AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒Axygen Biosciences--
Quantus™荧光计Promega--
Illumina MiSeq平台Illumina--
QuantiTect SYBR Green PCR试剂盒Qiagen--
CFX96系统Bio-Rad--
Lipofectamine™ 3000转染试剂----
CM-M048培养基Procell--
Invivofectamine™ 3.0转染试剂----
Hypoxyprobe™-1试剂盒Hypoxyprobe--
抗哌莫硝唑单克隆IgG1抗体----
HRP标记的山羊抗兔抗体Jackson Immuno Research Laboratories--
人IL-1β ELISA试剂盒SigmaRAB0273
人IL-6 ELISA试剂盒SigmaRAB0306
小鼠IL-1β ELISA试剂盒ExCell BioEM001
加热毯Two Little Fishies366

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
临床队列
纳入标准:胸腔镜肺部分切除术患者;排除标准见补充图1;配对粪便和血液样本;术后并发症Clavien-Dindo分类;围手术期抗生素使用
阅读提示:Materials and methods: Clinical cohort and patient data
16S rRNA测序和Bugbase分析
DNA提取试剂盒品牌;PCR引物(338F/806R);测序平台(Illumina MiSeq 2×300);OTU聚类(97%相似度);Bugbase表型预测数据库(Greengene)
阅读提示:Materials and methods: Microbiota analysis
动物手术/麻醉应激模型
小鼠品系、年龄、性别(8周龄雄性);麻醉:2.5-3%七氟烷,2小时;手术步骤:中线开腹,探查肝脾肾膀胱;术后镇痛:罗哌卡因0.1% 3mg/kg皮下注射
阅读提示:Materials and methods: Animal surgery/anesthesia stress model; Figure 3A
IL-1β干预
IL-1β siRNA序列和化学修饰(胆固醇偶联和2'-O-甲基修饰);siRNA剂量(10 nmol)和给药途径(尾静脉注射)及时间(术前2天);rIL-1β剂量(10 μg/kg)和给药途径(腹腔注射)
阅读提示:Materials and methods: IL-1β siRNA sequence selection; Chemically modified IL-1β siRNA and the in vivo knockdown effect validation in a mouse LPS model; Figure 4A
结肠环境检测
缺氧染色:pimonidazole HCl(60 mg/kg)腹腔注射处死前1小时;评分标准(0-3);ATP和乳酸测定试剂盒(Biovision);结肠上皮细胞取样方法
阅读提示:Materials and methods: Hypoxic staining of colon epithelia; ATP and lactate measurements of colon tissue