制备脱细胞ECM支架
获得组织特异性ECM材料作为生物墨水
使用巴马小型猪肺通过灌注脱细胞流程制备dECM,包括冻融、去离子水灌注、去垢剂处理等,冻干后储存。
Fabrication of biomimetic topological micropattern arrays to induce anisotropic/isotropic orientation of fibroblast.
实验包含微图案芯片制备、细胞培养、F-肌动蛋白染色与FFT分析、免疫荧光染色等步骤,但仅有体外细胞实验,缺乏功能验证和体内机制验证。
MRC-5人肺成纤维细胞系 巴马小型猪肺脱细胞ECM支架
微图案形状与尺寸:矩形(300×50 μm)和正方形(300×300 μm) 微图案间距:50 μm 细胞接种密度:1×10^5 MRC-5细胞每芯片 细胞培养时间:3天
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获得组织特异性ECM材料作为生物墨水
使用巴马小型猪肺通过灌注脱细胞流程制备dECM,包括冻融、去离子水灌注、去垢剂处理等,冻干后储存。
将dECM粉末转化为可用于微接触印刷的生物墨水
将dECM粉末用胃蛋白酶消化,中和至pH 7.2-7.4,调整浓度至10 mg/mL。
在培养皿上形成矩形或正方形dECM微图案
定制PDMS印章,表面镀有立方体突起,涂覆dECM水凝胶,干燥后压印至培养皿。
使成纤维细胞附着在微图案上并维持单层培养
用Pluronic F-127处理芯片防止非特异性粘附,紫外线灭菌,接种MRC-5细胞,培养3天。
定量评估成纤维细胞在微图案上的取向程度
F-肌动蛋白染色,共聚焦成像,使用ImageJ进行FFT分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 脱细胞处理 | Zoletil 50 | Virbac | -- |
| 丙泊酚 | Qingyuan Jiabo | -- | |
| Triton X-100 | Biofroxx | -- | |
| 月桂醇聚醚硫酸酯钠 | Biofroxx | -- | |
| 葡萄糖 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 制备dECM水凝胶 | 胃蛋白酶 | Sigma-Aldrich | -- |
| 盐酸 | -- | -- | |
| 微接触印刷 | 聚二甲基硅氧烷印章 | -- | -- |
| 异硫氰酸荧光素异构体 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 细胞培养皿 | BIOFIL | -- | |
| 细胞培养 | 改良Eagle培养基 | -- | -- |
| 胎牛血清 | Gibco | -- | |
| 非必需氨基酸 | Gibco | -- | |
| GlutaMAX | Gibco | -- | |
| 青霉素-链霉素溶液 | HyClone | -- | |
| Pluronic F-127 | Sigma-Aldrich | -- | |
| 细胞染色 | 罗丹明标记的鬼笔环肽 | Cytoskeleton | -- |
| DAPI | Biosharp | -- | |
| 免疫荧光染色 | 抗α-SMA抗体 | Abcam | ab7817 |
| 抗Ki-67抗体 | Abcam | ab16667 | |
| 二抗 | Invitrogen | -- | |
| 成像与分析 | 共聚焦显微镜 | Nikon | -- |
| 制备dECM水凝胶 | 威利磨 | Retsch | MM400 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 制备脱细胞ECM支架 | 动物体重、麻醉剂量、灌注液种类和顺序、灌注时间、冻融次数 阅读提示:Methods: Preparation of decellularized ECM scaffolds |
| 制备dECM水凝胶 | 胃蛋白酶浓度、消化时间、中和pH、最终浓度 阅读提示:Methods: Preparation of dECM hydrogel |
| 微接触印刷 | PDMS印章尺寸、微图案尺寸、间距、涂覆浓度、压印力、压印时间 阅读提示:Methods: Fabrication of micropattern array chips by microcontact printing; 图2 |
| 细胞培养 | 细胞系、接种密度、培养时间、Pluronic F-127浓度 阅读提示:Methods: Culture of fibroblasts on micropattern array chips; 图3 |
| 取向分析 | 染色浓度、孵育时间、成像方法、FFT分析参数 阅读提示:Methods: Analysis of fibroblast orientations; Fast Fourier transform analysis; 图3 |